قسم 2 ذیابیطس میلیتس کے ساتھ زکر ذیابیطس فربہ چوہوں میں گردوں کے نقصان، GRP78، اور آٹوفجی سے متعلق عوامل پر Cistanche Shenqiwan کے اثرات

عام نمکین کی مقدار چوہوں کو 4 ہفتوں تک لگاتار دیا گیا۔ چوہوں کی عمومی حالت کا باقاعدگی سے مشاہدہ کیا گیا۔ روزہ رکھنے والے خون میں گلوکوز (FBG) اور 24-گھنٹہ پیشاب کی مائیکرو البومین (24 گھنٹے U-mAlb) کی سطح کی پیمائش کی گئی۔ رینل ٹشو داغدار تھا اور مورفولوجی کا مشاہدہ کیا گیا تھا۔ الٹرا مائیکرو سٹرکچر کو ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کے ذریعے دیکھا گیا۔ چوہوں کے رینل ٹشو میں GRP78، بیکلن-1، اور LC3 کی mRNA لیولز کی جانچ ریئل ٹائم پی سی آر کے ذریعے کی گئی اور پروٹین کی سطح کو ویسٹرن بلاٹنگ کے ذریعے جانچا گیا۔ نتائج ماڈل گروپ کے مقابلے میں، شینکیوان گروپ میں چوہوں نے دکھایا

بہتر کھال کی چمک، زیادہ وزن میں اضافہ، اور زیادہ سرگرمی؛ FBG اور 24 h U-mAlb دونوں سطحوں میں کمی واقع ہوئی تھی (P < 0.05)۔ دیگردےماڈل گروپ میں چوہوں کی تعداد ظاہر ہوئی۔پھیلی ہوئی گلومیریلر کیپلیریاں, بے قاعدہ طور پر موٹی تہہ خانے کی جھلیوں، چوڑے میسنجیئل ایریاز، اور سیگمنٹل سکلیروسیس؛ ان گردوں میں رینل ٹیوبلر ایٹروفی اور رینل انٹرسٹیشل ریشے دار ٹشو بھی دیکھے گئے۔ ان پیتھولوجیکل تبدیلیوں کو شینکیوان گروپ میں ختم کیا گیا تھا۔ ماڈل گروپ کے مقابلے میں، GRP78 کے جین اور پروٹین کی سطح دونوں میں کمی واقع ہوئی تھی (P < 0.05) شینکیوان گروپ میں؛ بیکلن کی پروٹین کی سطح-1

کم کیا گیا تھا (P < {{0}}.05)؛ اور LC3 کی پروٹین کی سطح میں اضافہ کیا گیا تھا (P <0.05)۔ نتیجہ شینکیوان ZDF چوہوں میں گردوں کے نقصان کو کم کر سکتا ہے اور اینڈوپلاسمک ریٹیکولم تناؤ کو کم کر کے اور آٹوفجی کو بڑھا کر ذیابیطس کے گردے کی بیماری کے بڑھنے میں تاخیر کر سکتا ہے۔

 

مطلوبہ الفاظ: Shenqiwan;قسم 2 ذیابیطس mellitus; ذیابیطس گردے کی بیماری; اینڈوپلاسمک ریٹیکولم تناؤ؛آٹوفجی; GRP78; زکر ذیابیطس فیٹی چوہے

ذیابیطس کے گردے کی بیماری کے علاج کے لیے Cistanche مصنوعات کے بارے میں مزید معلومات جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

مزید تفصیلات کے لیے پوچھیں:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

ذیابیطس گردے کی بیماری(DKD) کی ایک اہم مائکرو واسکولر پیچیدگی ہے۔ذیابیطس mellitusاور اس کی ایک بڑی وجہآخری مرحلے کے گردوں کی بیماری[1]۔ DKD ایک اہم ہے۔ذیابیطس کی مائکرو واسکولر پیچیدگیاوراختتامی مرحلے کے گردوں کی بیماری کی ایک بڑی وجہ[1]۔ ڈی کے ڈی کے مریضوں میں مستقل پروٹینوریا اور مسلسل کمی واقع ہو سکتی ہے۔گلوومیرولر فلٹریشن کی شرح[2]۔ دیDKD کے روگجننپیچیدہ ہے، اور حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ گردے میں اینڈوپلاسمک ریٹیکولم اسٹریس (ERS) آخری مرحلے کے گردوں کی بیماری کی سب سے عام وجہ ہے۔ (اینڈوپلاسمک ریٹیکولم اسٹریس (ERS) اور آٹوفجی کا بھی DKD سے گہرا تعلق ہے، اور ان کے روگجنن کا مطالعہ DKD کے علاج کے لیے اہم ہو سکتا ہے۔ DKD چینی طب میں پیاس کی خرابی کے زمرے میں "نچلے ختم ہونے" سے زیادہ مشابہت رکھتا ہے۔
پیاس اور ضرورت سے زیادہ پینے اور پیشاب کی مخصوص علامات جن کوئی یاو (سنہری زائچہ کے لوازم) میں درج ہیں۔گردے کیوئ گولی۔بنیادی علاج کے فارمولے کے طور پر تجویز کیا جاتا ہے۔ جن کوئی یاو (金匮要略) نے پیاس اور بہت زیادہ پیشاب کی مخصوص علامات کو ریکارڈ کیا اور تجویز کیاگردے کیوئ گولی۔علاج کے اہم فارمولے کے طور پر۔ TCM کے ساتھ DKD کا علاج واقعی مؤثر طریقے سے گردوں کے افعال کی حفاظت کر سکتا ہے اور اس میں محفوظ اور قابل اعتماد خصوصیات ہیں [5-6]۔ چینی ادویات کے ساتھ DKD کا علاج مؤثر طریقے سے گردوں کے افعال کی حفاظت کر سکتا ہے اور اس میں محفوظ اور قابل اعتماد خصوصیات ہیں [5-6]۔ گردے کو ٹونیفائی کرنے اور یانگ کی مدد کرنے میں کڈنی کیوئ گولی کی افادیت متعلقہ مطالعات میں تصدیق کی گئی ہے [7]۔ ہمارا پچھلا مطالعہ بھی ہمارا پچھلا مطالعہ یہ بھی ظاہر کرتا ہے کہ رینل کیوئ گولیاں ذیابیطس کے چوہوں میں گردے کے ٹشوز کی ساخت اور کام پر اچھے حفاظتی اثرات مرتب کرتی ہیں [8]۔ موجودہ مطالعہ میں، ہم نے رینل کیوئ گولی کے اثرات کا مشاہدہ کیا موجودہ مطالعہ میں، ہم نے زکر ذیابیطس فیٹی چوہے (ZDF) میں گردوں کے ٹشو کو پہنچنے والے نقصان، ERS، اور آٹوفجی سے وابستہ عوامل پر رینل کیوئ گولیوں کے اثرات کا مشاہدہ کیا۔ اس مطالعے میں، ہم نے ZDF چوہوں میں گردوں کو پہنچنے والے نقصان کے ممکنہ میکانزم کی تحقیق کی اور اس کے اثرات کا مشاہدہ کیا۔گردوں کے ٹشو کو نقصان، ERS اور آٹوفجی سے متعلق عوامل جو گردوں کی کیوئ گولیوں کے ذریعہ ثالثی کرتے ہیں۔

1 مواد
1.1 تجرباتی جانور
بیس 12-ہفتہ پرانے SPF نر ZDF چوہوں (جسم کا ماس 390-410 جی، 5C08 اعلیٰ قسم کے چوہا چاؤ کو 4 ہفتوں کے لیے کھلایا گیا تاکہ ٹائپ 2 ذیابیطس کو مکمل کیا جا سکے) اور سات 12- ہفتے- پرانے SPF نر زکر لین (ZL) چوہے (باڈی ماس 350-380 g) بیجنگ وٹون لیہوا لیبارٹری اینیمل ٹیکنالوجی کمپنی سے خریدے گئے تھے۔ تمام چوہوں کو انسٹی ٹیوٹ آف کلینیکل میڈیسن، چین-جاپان فرینڈشپ ہسپتال کے رکاوٹ والے ماحول میں رکھا گیا تھا۔ ، لائسنس نمبر: SYXK (بیجنگ) 2016-0043، اور پلیٹ فارم نے رکاوٹ کے اندر ایک آزاد وینٹیلیشن سسٹم فراہم کیا، روشنی اور اندھیرے کے 12-گھنٹے کے ردوبدل کو برقرار رکھتے ہوئے، کمرے کا درجہ حرارت 23-25 ڈگری ، اور کمرے میں نمی کی نسبت 50 فیصد -60 فیصد۔ تمام چوہوں کو کھانا کھلانے کی مدت کے دوران آزادانہ طور پر پینے اور کھانا کھلانے کی اجازت تھی۔

1.2 اخلاقی جائزہ
جانوروں کے تجربات کو بیجنگ یونیورسٹی آف ٹریڈیشنل چائنیز میڈیسن (BUCM) کی اکیڈمک کمیٹی کی تجرباتی جانوروں کی اخلاقیات کی ذیلی کمیٹی نے منظوری نمبر BUCM-4-2021102801-4034 کے ساتھ منظور کیا تھا۔
1.3 اہم دوائیں اور ری ایجنٹس
گولیاں (شو دی ہوانگ، شان یو فی، شان یاو، موڈان پائی، فو لنگ،Cistanche, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) کی کاڑھی کے لیےگردے کیوئگولی بیجنگ ٹونگ رین تانگ کمپنی سے خریدی گئی تھی۔ فزیولوجیکل نمکین، تفصیلات: 500 ملی لیٹر، شیڈونگ ہوالو فارماسیوٹیکل کمپنی سلور سٹیننگ سلوشن (بیجنگ ریجن بائیوٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ، لاٹ نمبر DG0090)، میجک ایس وائی بی آر مکسچر (جیانگ سو کانگ وی) Century Biotechnology Co., Ltd.), mRNA Reverse Transscription Kit (Thermo Fisher Scientific, Inc.), RNA TRIzol Reagent (RNA TRIzol Reagent), RNA TRIzol Reagent (RNA TRIzol Reagent)۔ RNA TRIzol Reagent (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), Rat Urine Microalbumin ELISA Kit (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., Lot No. KT8560-A), GRP78 BiP Antibody, LC3B اینٹی باڈی اور Beclin{ {5}} اینٹی باڈی (Abcam, UK) (بیچ نمبر: ab108613, ab192890, ab207612)، خرگوش اینٹی GAPDH پولی کلونل اینٹی باڈی (پروٹینٹیک، USA)، بکری اینٹی خرگوش IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. لمیٹڈ)۔

 

بلڈ گلوکوز میٹر، خون میں گلوکوز ٹیسٹ سٹرپس (شنگھائی روچے ڈائیگنوسٹک پروڈکٹس کمپنی لمیٹڈ)، کم درجہ حرارت ہائی سپیڈ سینٹری فیوج (ایپینڈورف، جرمنی)، فلوروسینس مقداری پی سی آر آلہ، ڈبل عمودی الیکٹروفورسس آلہ اور ٹرانسفر الیکٹروفورسس انسٹرومنٹ (بی بی میڈیکل لائف) کمپنی لمیٹڈ)، جیل امیجر (پروٹین سادہ، یو ایس اے)، لائٹ مائکروسکوپ (لائیکا، جرمنی)، ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (لائیکا، جرمنی)، اور جیل امیجر۔ (لائیکا، جرمنی)، ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (ہٹاچی، جاپان)۔

2 طریقے
2.1 تجرباتی ادویات کی تیاری
کی کاڑھیگردے کیوئ گولی۔"ٹائیفائیڈ نسخوں کی خوراک اور تناسب پر مطالعہ" [2015] کے پہلے ایڈیشن میں میٹرولوجی کے ہان نظام کے قدیم اور جدید تناسب کے مطابق جن کوئی یاو میں کڈنی کیوئ گولی کی خوراک کو تبدیل کرکے تیار کیا گیا تھا۔ ]، اور تجربے کے لیے درکار کاڑھی کی خوراک حسب ذیل تھی: شو دی ہوانگ 24 گرام، شان یو فی 12 گرام،Cistanche10 جی، شان یاؤ 12 جی، موڈان پائی 9 جی، فو لنگ 9 جی، زی زی 9 جی، گننیرا 3 جی، اور گوئی زی 3 جی۔ منشیات کو آست پانی میں 2 گھنٹے تک بھگو دیا گیا تھا۔ اس کے بعد کاڑھی کو 30 منٹ تک مرتکز کیا گیا اور جراثیم سے پاک گوج کے ذریعے فلٹر کیا گیا۔ جڑی بوٹیوں کو 30 منٹ تک کاڑھیں، پھر بقیہ ادویات شامل کریں اور 1 گھنٹے کے لیے کاڑھیں۔ محلول کے درجہ حرارت کو کمرے کے درجہ حرارت پر کم کرنے کے بعد، محلول کو مرتکز کیا جاتا ہے اور جراثیم سے پاک گوز کے ذریعے فلٹر کیا جاتا ہے، اور فلٹریٹ کو -20 ڈگری پر پیک اور محفوظ کیا جاتا ہے۔ منشیات کو 1 ہفتہ سے زیادہ کے لئے ذخیرہ کیا جانا چاہئے، اور حل کو انتظامیہ سے پہلے کمرے کے درجہ حرارت پر لایا جانا چاہئے.

2.2 جانوروں کے ماڈلز کا قیام اور گروپ بندی
ZDF چوہوں کو 4 ہفتوں کے لیے 5C08 زیادہ چکنائی والی خوراک کے ساتھ حوصلہ افزائی کی گئی تھی، اور خون میں گلوکوز کی پیمائش 12 ہفتے کی عمر میں ٹیل ٹپ خون کے جمع کرنے سے کی گئی تھی۔ گردے کی کیوئ گولی کے گروپ میں چوہوں کو گردے کیوئ گولی کا پانی سے بھرا ہوا کاڑھا دیا گیا تھا، اور 8.12 گرام فی کلوگرام فی چوہا کی روزانہ خوراک کا حساب "تجرباتی جانوروں میں بیماری کے نمونے" [10] کے فارمولے کے مطابق کیا گیا تھا، اور خوراک کی حراستی 0.812 g/mL تھا، اور ماڈل اور کنٹرول گروپس میں چوہوں کو اسی حجم میں 4 ہفتوں تک نمکین دیا گیا۔

2.3 چوہوں کی عمومی حالت اور فاسٹنگ بلڈ گلوکوز (FBG) ٹیسٹ
چوہوں کے عمومی حالات کا روزانہ مشاہدہ اور ریکارڈ کیا جاتا تھا، اور جسم کے لوگوں کا باقاعدگی سے وزن کیا جاتا تھا۔ 12 ہفتوں اور 16 ہفتوں کی عمر کے اختتام پر، 8 گھنٹے کے روزے کے بعد چوہوں کی دم کی نوک سے خون جمع کیا گیا تھا، اور FBG کی پیمائش روشے بلڈ گلوکوز میٹر اور ٹیسٹ سٹرپس سے کی گئی تھی۔ 2.4 24-h پیشاب کی مائکرو البومین (24-h U-mAlb) کی پیمائش 16 ہفتوں کی عمر کے اختتام پر کی گئی تھی، اور 24-h U-mAlb کی حراستی کو ہدایات کے مطابق ماپا گیا تھا۔ LISA کٹ کی.

2.5 گردے کے ٹشو کے نمونوں کا مجموعہ
16 ہفتوں کی عمر کے اختتام پر، تمام چوہوں نے 8 گھنٹے تک روزہ رکھا۔ اینستھیزیا کے بعد، پیٹ کی گہا کھولی گئی اور دو طرفہ گردے کھل گئے، اور پیریٹونیم کو برقرار رکھا گیا اور اسے چھیل دیا گیا۔ 3 μm پیرافین سیکشنز کی تیاری کے لیے گردے کی پرانتستا کو الگ کیا گیا تھا اور جزوی طور پر 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ میں طے کیا گیا تھا۔ جزوی طور پر 1 ملی میٹر 3 ٹشو بلاکس میں کاٹ کر 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائیڈ میں الٹراتھین حصوں کی تیاری کے لیے طے کیا جاتا ہے۔ بقیہ گردے کے ٹشوز کو ریئل ٹائم پی سی آر اور ویسٹرن بلوٹنگ اسسیس کے لیے -80 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا۔

 

2.6 گردے کے ٹشوز کے مورفولوجیکل مشاہدے کا اطلاق
پی اے ایس سٹیننگ، میسن سٹیننگ، اور ہیکسامونیم سلور-ہیماتوکسیلین-ایوسین سٹیننگ کا مشاہدہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔گردوں کی ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاںہلکی خوردبین کے نیچے اور تصاویر حاصل کرنے کے لیے۔ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کو گردے کے ٹشوز کی الٹراسٹرکچرل تبدیلیوں کا مشاہدہ کرنے کے لیے لاگو کیا گیا تھا اور تصاویر اکٹھی کی گئی تھیں۔

 

2.7 ریئل ٹائم پی سی آر پرکھ
منجمدگردے کے ؤتکوںبرف پر گرا ہوا تھا اور کل RNA نکالنے کے لیے TRIzol ریجنٹ شامل کیا گیا، اور 9.5 سینٹی میٹر کے رداس کے ساتھ 4 ڈگری پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے 12 000 r/min پر 10 منٹ کے لیے نکالا گیا، اور پھر کلوروفارم کے ساتھ 15 منٹ کے لیے سینٹرفیوگ کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کو دوبارہ 15 منٹ کے لیے کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا، اور سپرنٹنٹ کو 75 فیصد ایتھنول سے دھویا گیا۔ ایم آر این اے کی سطح پر اظہار۔ پرائمر کو پرائمر پریمیئر 5.0 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ڈیزائن کیا گیا تھا اور شنگھائی بائیو انجینیئرنگ کمپنی لمیٹڈ نے تیار کیا تھا۔ پرائمر کی ترتیب درج ذیل ہے۔