خلاصہ

پس منظر: یہ اطلاع دی گئی ہے کہ رائل جیلی میلانین کی ترکیب کو کم کرے گی اور میلانوجینیسیس سے متعلق پروٹین اور جینز کے اظہار کو روکے گی۔ اس مطالعہ میں، ہم Apis mellifera کی رائل جیلی سے 10-hydroxy-2-decanoic acid (10-HDA) کی اینٹی میلانوجینک اور ڈیپگمنٹنگ سرگرمی کا جائزہ لیتے ہیں۔

کچھ مطالعات نے یہ تجویز کیا ہے۔cistancheکی طرف سے جلد کی عمر کو روکنے میں مدد مل سکتی ہےآکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرنااورسوزش، جس میں دونوں حصہ ڈال سکتے ہیں۔جھرریاں, گہرے دھبے، اور عمر بڑھنے کی دیگر علامات۔ تاہم، یہ واضح نہیں ہے کہ آیاcistancheکر سکتے ہیںجلد کو ہلکا کریںیاpigmentation کو کم کریں. مختصراً، اگرچہ cistanche کے جلد پر کچھ فائدہ مند اثرات ہو سکتے ہیں، لیکن یہ واضح نہیں ہے کہ آیا اسے قابل اعتماد کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔جلد کو سفید کرناایجنٹ اپنی جلد کی دیکھ بھال کے محفوظ اور موثر طریقوں کے بارے میں مشورہ کے لیے ماہر امراض جلد سے مشورہ کرنا ہمیشہ بہتر ہے۔

سفیدی کے لیے Cistanche Tubulosa پر کلک کریں۔

مزید معلومات کے لیے:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

طریقے:اس مطالعہ میں، ہم {{0}} کے ساتھ علاج کے بعد B16F1 میلانوما خلیوں میں انٹرا سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی، میلانین مواد، اور میلانین کی پیداوار سے متعلق پروٹین کی سطحوں میں تبدیلیوں کے مقابلے میں ایچ ڈی اے سفید کرنے کی سرگرمی کا اندازہ لگاتے ہیں۔ }}ایچ ڈی اے۔ مزید برآں، DL کے اثر کا مشاہدہ کرنے کے لیے چوہوں کی جلد (C57BL/6 J) پر 0.5 فیصد، 1 فیصد، اور 2 فیصد 10- ایچ ڈی اے پر مشتمل کریم پروڈکٹ کو 3 ہفتوں تک لگا کر جلد کی سفیدی کے اثر کا اندازہ لگایا گیا۔ * - اقدار

نتائج:نتائج سے ظاہر ہوا کہ 10-HDA نے B16F1 میلانوما خلیوں میں MITF پروٹین اظہار (IC50 0.86 mM) کو روک دیا۔ مغربی دھبے کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ 10-HDA نے ٹائروسینیز کی سرگرمی اور ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 1 (TRP-1)، TRP-2، اور مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) کے اظہار کو روک دیا۔ B16F1 میلانوما خلیوں میں۔ اس کے علاوہ، چوہوں کی جلد پر لاگو ہونے والا 10-HDA نمایاں طور پر بڑھے ہوئے اوسط جلد کو سفید کرنے والے انڈیکس (L قدر) کو ظاہر کرتا ہے۔

نتیجہ:توثیق کے اعداد و شمار نے جلد کی رنگت کو دبانے میں استعمال کے لیے 10-HDA کی صلاحیت کی نشاندہی کی۔ 10-ایچ ڈی اے کو میلانوجینیسیس کو روکنے کے لیے ایک امیدوار کے طور پر تجویز کیا گیا ہے، اس طرح اسے کاسمیٹکس جلد کی دیکھ بھال کی مصنوعات کے طور پر تیار کیا جا سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:رائل جیلی، 10-ہائیڈروکسی-2-ڈیکانوک ایسڈ، میلانوجینیسیس، جلد کو سفید کرنے والا، میلانوجینیسیس روکنے والا

پس منظر

رائل جیلی (RJ) ایک نوجوان ورکر مکھی (Apis mellifera) کی رطوبت ہے جو hypopharyngeal اور mandibular glands سے تیار ہوتی ہے، ترقی پذیر ملکہ مکھی کو اسے اپنی زندگی بھر کے لیے خصوصی طور پر کھلایا جاتا تھا [1]۔ RJ پروٹین، مفت امینو ایسڈز، لپڈز، وٹامنز اور شکر کی وافر مقدار کی وجہ سے اعلیٰ غذائیت کی قدریں فراہم کرتا ہے [2، 3]۔ آر جے کے بائیو ایکٹیو پروٹین بڑے رائل جیلی پروٹینز (MRJPs)، ایپیسمین، اور رائلائزنگ ہیں، جنہوں نے کئی مطالعات میں امیونوریگولیٹری اور اینٹی بیکٹیریل اثرات دکھائے ہیں [4–6]۔ 10-ہائیڈروکسی-2- ڈیکانوک ایسڈ (10-HDA) RJ میں ایک بڑا فیٹی ایسڈ تھا جو انسانوں کے لیے صحت کے لیے بہت سے فائدہ مند اثرات رکھتا ہے، جس نے اینٹی ٹیومر، اینٹی بیکٹیریل، اور امیونوموڈولیٹری سرگرمیوں کا مظاہرہ کیا ہے [7] -9]۔ 10-HDA صرف RJ میں پایا جاتا ہے لہذا اسے شاہی جیلی مصنوعات کے معیار کے نشان کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے [10, 11]۔ RJ کی کئی فارماسولوجیکل سرگرمیوں کی پہلے ہی جانوروں کے تجربات سے تصدیق ہو چکی ہے، اور فارماسولوجیکل سرگرمیاں بشمول اینٹی آکسیڈیشن [12, 13]، اینٹی سوزش [14]، اینٹی ٹیومر [15، 16]، اینٹی ایجینیسیس [17]، اینٹی بیکٹیریل [18-20]، واسوڈیلیٹیو [21، 22]، ہائی بلڈ پریشر [21، 22]، اینٹی ہائپرکولیسٹرولیمک [23]، نیفرو پروٹیکٹو [24] اور جلد کو سفید کرنے والے اثرات [25]۔ اس کی غذائیت کی قیمت اور انسانی صحت کے لیے اس کے فائدے کی بنیاد پر مارکیٹوں میں زیادہ سے زیادہ تجارتی RJ مصنوعات دستیاب ہیں۔

جانوروں اور انسانوں کی جلد کا رنگ جلد میں میلانین پگمنٹ کے مواد سے متعلق ہے۔ میلانین کا کردار جلد کو UV روشنی سے ہونے والے نقصان سے بچانا ہے، لیکن میلانین کا زیادہ جمع ہونا جلد کے سنگین امراض کا باعث بنتا ہے جیسے کہ رنگت اور رنگت اور جلد کی عمر میں تیزی [26]۔ میلانین کو میلانوجینیسیس میکانزم کے ذریعے ایپیڈرمس کی سب سے اندرونی تہہ میں واقع میلانوسائٹس میں ترکیب کیا گیا تھا [27]۔ میلانوجینیسیس ایک پیچیدہ بایو سنتھیٹک راستہ ہے جسے ٹائروسینیز، ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 1 اور 2 (TRP-1 اور TRP-2)، اور مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) [28, 29] کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے۔ ٹائروسینیز میلانین کی ترکیب کو کنٹرول کرنے کے لیے شرح کو محدود کرنے والا انزائم ہے۔ میلانین کی پیداوار کا پہلا مرحلہ L-tyrosine کا L-3،4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) سے ہائیڈروکسیلیشن اور L-DOPA کا ڈوپاکوئنون میں تبدیل ہونا ہے [30]۔ TRP-2 5،{19}} dihydroxy indole-carboxylic acid کی پیداوار کو dopachrome سے تبدیل کرتا ہے، اور TRP-2, 5,6- dihydroxy indole carboxylic acid کی پیداوار TRP کے لیے سبسٹریٹ-1 انڈول میں تبدیل-5،6-کوئنون کاربو آکسیلک ایسڈ، بالآخر میلانین کی ترکیب کا نتیجہ [31, 32]۔ میلانین کی ترکیب کو رکاوٹ میلانوجینیسیس کے ذریعے روکنا ہائپر پیگمنٹڈ عوارض جیسے میلاسما اور عمر کے دھبوں کو روکنے یا بہتر کرنے کا بڑا طریقہ ہوگا۔ لہذا، melanogenesis میں ان عوامل کو کم کرنے کے لیے ایک ممکنہ، محفوظ اور موثر مرکب کی تلاش طبی اور کاسمیٹک انڈسٹری میں قابل ذکر ہو گی [25, 33, 34]۔

رائل جیلی کا مظاہرہ کیا گیا ہے جو میلانین کی ترکیب کو کم کر سکتا ہے [22]، لیکن RJ کی ان سرگرمیوں کا بنیادی فعال مرکب یا طریقہ کار نامعلوم ہے۔ ہمارے پچھلے مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ 10-HDA ٹائروسینیز سرگرمی (غیر مطبوعہ ڈیٹا) کو روک سکتا ہے۔ اس مطالعہ میں، 10-ایچ ڈی اے کی طرف سے ٹائروسینیز پر روکنے والے اثر کا مزید جائزہ لیا گیا۔ B16F10 میلانوما سیل کلچر کا استعمال کرتے ہوئے وٹرو ماڈلز میں میلانن بائیو سنتھیسز اور جلد کی درخواست کے ساتھ ماؤس کا جانوروں کا ماڈل دونوں کو 10-HDA کے میلانوجینیسیس روکنے والے اثر کی تحقیقات کے لیے انجام دیا گیا۔

طریقے

شاہی جیلی سے 10-HDA کی تیاری

رائل جیلی ہوالین، تائیوان میں فو-چانگ شہد کی مکھیوں کے پالنے کے ذریعے تیار کی گئی۔ 3-دن کی عمر کے لاروا کو فریموں پر کوئین سیل کپ میں منتقل کیا گیا تھا، اور ہر فریم میں 30 کوئین کپ تھے۔ فریموں کو شہد کی مکھیوں کے چھتے میں منتقل کیا گیا تھا، اور لاروا کو منتقل کرنے کے بعد RJ کو 72 گھنٹے بعد جمع کیا گیا تھا۔ ہر چھتے میں تقریباً 25،000 شہد کی مکھیاں ہوتی ہیں [35]۔ جمع کردہ RJ نمونوں کو مزید تجزیہ تک −20 ڈگری پر رکھا گیا۔ رائل جیلی (40 جی) کو میتھانول (400 ملی لیٹر × 4 × 30 منٹ) کے ساتھ ریفلکس کیا گیا تھا، اور سپرناٹینٹ کو سینٹرفیوگریشن کے ذریعے 4500 ایکس جی پر 30 منٹ کے لیے کاٹا گیا تھا۔ RJM نامی خام عرق (10.76 جی) حاصل کرنے کے لیے سپرنٹنٹ کو کم دباؤ کے تحت مرتکز کیا گیا تھا۔ میتھانول میں معطل RJM کو سلیکا جیل کالم کرومیٹوگرافی (SiO2 CC) کے ذریعے پاک کیا گیا اور پھر TLC کے ذریعے تجزیہ کیے گئے دس حصوں کو حاصل کرنے کے لیے کلوروفارم اور میتھانول گریڈینٹ (300:1 سے 1:1) کے ساتھ صاف کیا گیا۔ فرکشنز 4 اور 5 نے نمایاں جگہیں ظاہر کیں، اور اس لیے انہیں مزید تطہیر اور تجزیہ کا نشانہ بنایا گیا۔ فریکشن 4 اور 5 کو بار بار SiO2 CC (کلوروفارم/میتھانول، 300:1 سے 1:1 تک) کے ذریعے صاف کیا گیا اور {{30}ہائیڈروکسی-2-ڈیکانوک ایسڈ ({{32}) حاصل کرنے کے لیے ایسیٹون کے ساتھ مزید کرسٹلائز کیا گیا۔ } ایچ ڈی اے)۔ پیوریفائیڈ پروڈکٹ کی کیمیائی ساخت کی تصدیق NMR اور GC ماس سپیکٹرا تجزیہ سے ہوئی۔ 10-HDA مقداری تجزیہ کا تعین اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ذریعے کیا گیا تھا جس میں واٹر 1525 پمپنگ سسٹم واٹر 2489 ڈیٹیکٹر، ایک RP-8 GP250 کالم (4.6 ملی میٹر) اور ایک واٹرس سے لیس تھا۔ 717 پلس آٹو سیمپلر۔ موبائل فیز میتھانول سلوشن تھا (60:40 v/v الٹرا پیور اور ڈیونائزڈ پانی کے ساتھ) فاسفورک ایسڈ کے ساتھ pH 2.5 میں ایڈجسٹ کیا گیا، ایک جھلی (0.45 μm) کے ذریعے فلٹر کیا گیا، اور 5 منٹ کے لیے ڈیگاس کیا گیا۔ موبائل فیز فلو ریٹ کو 1.0 ملی لیٹر فی منٹ میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا، اور پتہ لگانے کی کارکردگی 225 این ایم پر کی گئی تھی۔ حتمی پیوریفائیڈ نمونے میں 10HDA کا مواد 90 فیصد ہے، جسے مزید تجزیہ کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔

سیل کلچر اور {{0}HDA علاج

B16F10 میلانوما خلیات (BCRC نمبر: 60,031) Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagles میڈیم (DMEM) میں 10 فیصد (v/v) فیٹل بوائن سیرم کے ساتھ 37 ڈگری پر مرطوب، CO2-کنٹرول (5 فیصد) میں کلچر کیے گئے تھے۔ . خلیات کو ایک مناسب خلیے کی کثافت پر 24-کنویں یا 6-کنویں کی پلیٹ میں سیڈ کیا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے 1 دن کے بعد، خلیات کو 10-HDA کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا۔ میڈیم کو کنٹرول گروپ میں 10-HDA کے بجائے استعمال کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، خلیوں کی کٹائی کی گئی اور مختلف اسیس کے لیے استعمال کیا گیا۔

سیل کی عملداری کی پیمائش

سیل کی عملداری کی پیمائش {{0}}(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5 -diphenyltetrazolium bromide (MTT) پرکھ کے مطابق کی گئی تھی۔ کارمائیکل ایٹ ال کے ذریعہ رپورٹ کردہ طریقہ۔ [36]۔ B16F10 میلانوما سیلز DMEM میں کلچر کیے گئے تھے جن میں 10 فیصد FBS اور 1 فیصد L-glutamine (4 mM) 37 ڈگری پر 5 فیصد CO2 انکیوبیٹر میں تھا۔ مہذب خلیات (1 × 104 خلیات/کنویں) کو ایک 96-کنویں پلیٹ میں سیڈ کیا گیا تھا، 10-ایچ ڈی اے (ڈائمتھائل سلفوکسائڈ (DMSO) میں تحلیل کیا گیا تھا) 1، 0.5، 0.1 کے ارتکاز پر میڈیم سے پتلا کیا گیا تھا۔ ایم ایم اور کوجک ایسڈ 1 ایم ایم کنوؤں میں شامل کیا گیا۔ میڈیم کو خالی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ 5 فیصد CO2 کے نیچے 37 ڈگری پر 24-گھنٹہ انکیوبیشن کے بعد، میڈیا کو ہر کنویں سے ہٹا دیا گیا، پھر کنویں کو PBS (1 M فاسفیٹ-بفر نمکین) سے دو بار دھویا گیا۔ ہر کنویں میں 200 ul MTT محلول (2 mg/ml) شامل کیا گیا۔ 4-گھنٹہ انکیوبیشن کے بعد DMSO کے 100 μL کا اضافہ کر کے رد عمل کو ختم کر دیا گیا۔ ہر کنویں کی جاذبیت کو 540 nm میں امیونوسے ریڈر (BIO-TEK، Winooski، VT) [20–23] کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ سیل کی قابل عملیت کا تعین مندرجہ ذیل مساوات سے کیا گیا تھا: سیل کی عملداری ( فیصد )=[(AB)/ C] × 100 فیصد، A: نمونہ جاذب حجم، B: خالی جذب اینس والیوم، C: کنٹرول جاذب حجم۔

سیلولر میلانین مواد کی پیمائش

B16F10 میلانوما خلیوں کے انٹرا سیلولر میلانین مواد کو Bilodeau et al.، [37] کے ذریعہ بیان کردہ ترمیم شدہ طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ B16F10 میلانوما سیل کلچرنگ کے اختتام پر، خلیات کی کٹائی اور پی بی ایس کے ساتھ دھوئے گئے۔ کٹے ہوئے خلیوں کو کولڈ لیسیز بفر (20 ایم ایم سوڈیم فاسفیٹ (پی ایچ 6.8)، 1 فیصد ٹرائٹن ایکس-100، 1 ایم ایم فینیلمیٹائل سلفونائل فلورائیڈ (پی ایم ایس ایف)، 1 ایم ایم ایتھیلینیڈیامینیٹیٹراسیٹک ایسڈ (EDTA)) میں ڈالا گیا تھا۔ 15،000×g پر 30 منٹ کے لیے سینٹرفیوگریشن کے بعد، چھرے 1 N NaOH میں تحلیل کیے گئے جس میں 20 فیصد DMSO 1 گھنٹے کے لیے 60 ڈگری پر تھا۔ بریڈ فورڈ پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سپرنٹنٹ میں پروٹین کے مواد کا تعین کیا گیا تھا۔ 405 nm پر جاذبیت کی پیمائش کی گئی، اور میلانین کے مواد کو مصنوعی میلانین کے معروف معیار کے خلاف شمار کیا گیا۔ میلانین کی سطح ( فیصد )=[(AB)/ C] × 100 فیصد ; A: نمونہ جاذب حجم؛ B: خالی جاذب حجم؛ C: جاذب حجم کو کنٹرول کریں۔

سیلولر ٹائروسینیز کی سرگرمی کی پیمائش

ایک ٹائروسینیز سرگرمی پرکھ اس طریقہ کے مطابق انجام دی گئی تھی جو پہلے مارٹنیز-ایسپرزا ایٹ ال کے ذریعہ بیان کیا گیا تھا، [38]، معمولی ترمیم کے ساتھ۔ B16F10 میلانوما خلیوں کو 20 mM سوڈیم فاسفیٹ (pH 6.8)، 1 فیصد Triton X-100، اور 1 mM phenylmethane سلفونیل فلورائیڈ یا PMSF میں ڈالا گیا، اور 14،000 rpm پر 15 منٹ پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ پروٹین کے معیار کے طور پر بووائن سیرم البومین (BSA) کے ساتھ بریڈ فورڈ پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے ہر سپرنٹنٹ کے پروٹین کے مواد کا تعین کیا گیا تھا۔ ٹائروسینیز کی سرگرمی کا تعین ایک رد عمل کے مرکب (1 ملی لیٹر) میں کیا گیا تھا جس میں 50 ایم ایم فاسفیٹ بفر (پی ایچ 6.8)، 2 ایم ایم ایل ڈوپا، اور 300 یو جی سپرنٹنٹ پروٹین شامل تھے۔ 15 منٹ تک 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کرنے کے بعد، 475 این ایم پر جاذبیت کو مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ ٹائروسینیز سرگرمی ( فیصد )=[(AB)/ C] × 100 فیصد ; A: نمونہ جاذب حجم؛ B: خالی جاذب حجم؛ C: جاذب حجم کو کنٹرول کریں۔

مغربی دھبے کا تجزیہ

سیلز کو 3 بار برف کے ٹھنڈے PBS میں دھویا گیا اور RIPA بفر (pH 7.4، 50 mM tris، 0.1 فیصد SDS، 50 mM NaCl، 1 فیصد NP-40، 1 mM PMSF، 10 ug/mL aprotinin اور 10 ug/mL leupeptin)۔ بریڈ فورڈ پرکھ کے طریقہ کار کے ذریعہ بوائین سیرم البومین کو معیار کے طور پر استعمال کرتے ہوئے پروٹین کے مواد کا تعین کرنے کے لئے لیسیٹ کا ایک ایلی کوٹ استعمال کیا گیا تھا۔ پروٹین (40 ug) کو 10 فیصد SDS پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس پر الگ کیا گیا تھا اور Hybond-C ایکسٹرا نائٹروسیلوز جھلی (Amersham Bioscience, UK) پر داغ دیا گیا تھا۔ جھلیوں کو Tris-buffer saline (TBS) میں 5 فیصد غیر چکنائی والے دودھ کے ساتھ بلاک کیا گیا تھا جس میں 10 mM Tris-HCl، pH 7.5، اور 150 mM NaCl 30 منٹ کے لیے تھا۔ MITF، tyrosinase، dopachrome tautomerase 2 (TRP-2)، TRP-1، اور -actin (بطور اندرونی کنٹرول) کا بالترتیب خرگوش پولی کلونل اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے پتہ چلا۔ جھلیوں کو مزید بکری کے پولی کلونل سیکنڈری اینٹی باڈی سے خرگوش IgG-H&L (HRP) سے لگایا گیا تھا۔ تمام پابند اینٹی باڈیز کا پھر سپر سگنل ® ویسٹ پیکو کیمیلومینیسینٹ سبسٹریٹ (ای سی ایل) (تھرمو سائنٹیفک) کا استعمال کرتے ہوئے پتہ چلا۔ ہر بینڈ کے سگنل کی شدت کو ایک ڈینسٹومیٹر سسٹم Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) کے ساتھ ایک انٹیگریٹر سے لیس اور اندرونی کنٹرول کے ساتھ نارملائز کیا گیا تھا۔

چوہوں میں depigmenting سرگرمی کا تعین

تائی ایٹ ال کے ترمیم شدہ پروٹوکول کے ذریعہ ماؤس ماڈل سسٹم کے ذریعہ ڈیپگمنٹنگ سرگرمی کی جانچ کی گئی تھی۔ [39]۔ مطالعہ کو نیشنل فارموسا یونیورسٹی کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا (منظوری نمبر: 10,401)۔ پانچ ہفتے پرانے مادہ کالے چوہے (C57BL/6 J)، جس کا وزن 20 سے 25 گرام ہے، نیشنل اینیمل لیبارٹری سنٹر، تائی پے سے خریدا گیا۔ تمام تجربات کے دوران، جانوروں کو مستقل درجہ حرارت (25 ڈگری ± 2 ڈگری) کے ساتھ ایک ایئر کنڈیشنڈ کمرے میں رکھا گیا اور 12 گھنٹے کی روشنی پر رکھا گیا: تاریک سائیکل۔ جانوروں کو تجربے سے 7 دن پہلے ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ اپنے بال منڈوانے کے بعد، جانوروں کو 1- دن کا آرام دیا گیا۔ جیل کے نمونے جن میں 10-HDA شامل تھے ویسلین میں دوائیاں ڈال کر تیار کیے گئے تھے۔ کل چالیس چوہوں کو یکساں طور پر پانچ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا اور ہر گروپ کو روزانہ دو بار 0.1 جی ویسلین (کنٹرول)، ویزلین میں 1 فیصد کوجک ایسڈ، 0.5 فیصد، 1 فیصد، یا 2 فیصد 10- ویسلین میں ایچ ڈی اے کے ساتھ مسح کیا گیا تھا۔ . درخواستیں 3 ہفتوں تک جاری رہیں، اور جلد کو سفید کرنے کا انڈیکس (ایل ویلیو) ہر روز جلد کے اسی حصے پر ڈرما لیب ® کومبو (کوٹیکس ٹیکنالوجی، ڈنمارک) کے ساتھ ماپا جاتا ہے، جو کہ ایک رنگین آلہ ہے جو زیادہ شدت والے سفید رنگ کا استعمال کرتا ہے۔ روشنی کے منبع کے طور پر ایل ای ڈی۔ کلر میٹرک آلہ کمپیوٹر سے منسلک ہوتا ہے [40]۔ ہم نے صرف L پیرامیٹر پر غور کیا، اور L- ویلیو نسبتہ چمک تھی، کل سیاہ (L=0) سے کل سفید (L=100) تک۔ ابتدائی جلد کو سفید کرنے والے انڈیکس ایل ویلیو کو ٹیسٹ شدہ مادوں کے ساتھ لاگو کرنے سے پہلے ہر ماؤس کی جلد سے لگایا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ

اس مطالعے کے تمام نتائج کا شماریاتی تجزیہ سسٹم سافٹ ویئر پیکج ورژن 9.1 (شماریاتی تجزیہ سسٹم انسٹی ٹیوٹ، 2002) سے دستیاب عمومی لکیری ماڈل طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ ڈنکن کا ایک سے زیادہ رینج ٹیسٹ [41] علاج کے ذرائع کے درمیان فرق کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ہر تجربہ سہ رخی میں کیا گیا تھا۔

نتائج

B16F1 میلانوما سیل کی قابل عملیت پر 10-HDA کا اثر

B16F1 میلانوما سیلز میں MTT کے ذریعے سیل وائبلٹی پرکھ سے بہترین خوراک تصویر 1 میں دکھائی گئی ہے۔ اس نے واضح طور پر ظاہر کیا کہ 10-HDA B16F1 میلانوما خلیوں کے لیے سائٹوٹوکسک نہیں تھا 0.1، { {8}}.5، اور 1 ایم ایم، اور کوجک ایسڈ 1 ایم ایم کے ارتکاز میں میلانوما خلیوں کے لیے سائٹوٹوکسک نہیں تھا۔ 1.5 ایم ایم 10-ایچ ڈی اے (P < 0۔{21}}5) (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) اور 5 کے سامنے آنے والے میلانوما خلیوں میں سیل کی عملداری میں نمایاں کمی واقع ہوئی (20 فیصد کمی) ایم ایم کوجک ایسڈ۔ لہذا، بعد کے تجربات میں 0.1، 0.5، 10-HDA کے 1 mM، اور 1 mM کوجک ایسڈ کی ارتکاز کا اطلاق کیا گیا۔

{{2}HDA کے ذریعے B16F10 میلانوما خلیوں میں ٹائروسینیز کی سرگرمی اور میلانین کی ترکیب کی روک تھام

کوجک ایسڈ ایک مؤثر اور معروف اینٹی میلانوجینیسیس ایجنٹ ہے اور اس مطالعہ میں اسے مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ 10-HDA نمایاں طور پر (p < 0۔{13}}5) غیر علاج شدہ B16F1 میلانوما خلیوں کے کنٹرول کے مقابلے میں میلانین کی ترکیب اور ٹائروسینیز کی سرگرمی کو دباتا ہے۔ 1 ایم ایم کی خوراک پر، 10- ایچ ڈی اے نے سیلولر ٹائروسینیز سرگرمی میں 28 ± 2.4 فیصد کمی کی حوصلہ افزائی کی (P < 0۔{19}}1) اور 40.4 ±3 {32}} سیلولر میلانین ترکیب میں فیصد کمی (P <0.001)، جبکہ کوجک ایسڈ (1 ایم ایم) نے بھی نمایاں طور پر ٹائروسینیز سرگرمی اور میلانین کی ترکیب میں 14.4 ± 3.7 فیصد (P <0.05) اور 19.3 ± 1.5 فیصد (P <0.05) کی کمی کی <0.001)، بالترتیب (تصویر 2 اور 3)۔

B16F10 میلانوما سیلز میں 10-HDA کے ذریعے ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 پروٹین کے اظہار کو دبانا

اس بات کی تحقیق کرنے کے لیے کہ آیا 10-HDA میلانوجینک پروٹین کے اظہار کو متاثر کر سکتا ہے، مغربی بلوٹنگ کا تجزیہ B16F10 میلانوما سیلز کے لیسیٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جس کا علاج 10-HDA (تصویر 4) سے کیا گیا تھا۔ 10-ایچ ڈی اے نے ڈرامائی طور پر ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 اظہارات کو B16F1 میلانوما خلیوں میں غیر علاج شدہ خلیوں کے مقابلے میں روکا (تصویر 4b–d)۔ -ایکٹین، ایک ہاؤس کیپنگ پروٹین جو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال ہوتا تھا، کوئی تبدیلی نہیں دکھائی۔ 10-HDA نے کوجک ایسڈ کی طرح میلانوجینک انزائمز کے پروٹین اظہار کی سطح کو روک دیا۔

B16F10 خلیوں میں میلانوجینک عوامل سے متعلق پروٹین کی سطح پر 10-HDA کا روک تھام کا اثر

ممالیہ کے خلیوں میں میلانوجینیسیس کے عمل کے دوران، MITF TRPs کے راستے کی ترکیب میں اہم ریگولیٹر کا کردار ادا کرتا ہے، بشمول TYR، TRP{{0}}، اور TRP-2 [25, 26]۔ MITF اظہار پر 10-HDA کے اثر کا جائزہ مغربی بلاٹنگ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ B16F1{{10}} میلانوما خلیات 10- ایچ ڈی اے (0.1، 0.5، اور 1 ایم ایم) کے مختلف ارتکاز کے سامنے آئے تھے، جس کے نتیجے میں 10-HAD (HAD) کے ذریعے MITF اظہار کو کم کیا گیا تھا۔ تصویر 4e)۔ IC50 قدر برائے 10-MITF اظہار کے HDA دبانے کا تخمینہ 086 mM تھا۔ موجودہ نتائج بتاتے ہیں کہ MITF پروٹین کی سطح 10-HDA سے کم ہوتی ہے۔ 10-HDA کا hypopigmentation اثر ڈاؤن ریگولیٹڈ MITF جین اظہار کا نتیجہ ہو سکتا ہے، جو پھر ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 کے پروٹین اور جین کے اظہار کو دباتا ہے۔

چوہوں کے ذریعے vivo میں 10-HDA کی خاکہ سازی کی سرگرمی کا جائزہ

انسانی خوراک کے بارے میں قیاس کرنے کے لیے، ہم نے {{0}}HDA کی خاکہ سازی کی سرگرمی کی تحقیقات کے لیے جانوروں کے ماڈل کے طور پر چوہوں کا استعمال کیا۔ مونڈنے کے بعد، چوہوں کا علاج ویزلین میں 1 فیصد کوجک ایسڈ، 0.5 فیصد، 1 فیصد، یا 2 فیصد 10-ویسلن میں ایچ ڈی اے کے ساتھ کیا گیا، اور جلد کو ہلکا کرنے والے انڈیکس کی پیمائش اور ریکارڈ کیا گیا۔ ویوو اسٹڈی میں اس کے لیے، ہم نے کوجک ایسڈ کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا۔ کوجک ایسڈ کو دنیا بھر میں جلد کے ڈیپگمنٹیشن تھراپی ایجنٹ کے طور پر بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔ علاج کے پہلے ہفتے کے بعد، کنٹرول کے مقابلے 10- ایچ ڈی اے کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں جلد کی سفیدی کی ڈگری میں نمایاں اضافہ ہوا، اور یہ اضافہ تجربہ کے اختتام تک جاری رہا۔ 0.5، 1، اور 2 فیصد 10-ایچ ڈی اے کی ڈپگمنٹنگ سرگرمی 1 فیصد کوجک ایسڈ کے مقابلے تھی۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 10-HDA نمایاں طور پر چوہوں کی جلد پر جلد کی سفیدی کو 0.5 فیصد (تصویر 5) کے کم ارتکاز میں فروغ دینے میں کامیاب رہا۔ لہذا، جلد کو سفید کرنے والے ایجنٹ کے طور پر جلد کے ہائیپر پگمنٹیشن کے علاج کے لیے ایچ ڈی اے ایک اچھا امیدوار معلوم ہوتا ہے۔

بحث

میلانین کی ترکیب کو ٹائروسینیز، TRP1، اور TRP2 کے پیچیدہ انزیمیٹک جھرن کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے۔ melanogenesis سے متعلق جین اور پروٹین کی روک تھام کی ڈگری depigmenting agent کی افادیت میں ایک اہم کردار ادا کرتی ہے، جو عام طور پر hyperpigmentation یا کاسمیٹک مصنوعات کے علاج میں استعمال ہوتا ہے [28]۔ melanogenesis پر 10-HDA کے حقیقی روک تھام کے اثر کو واضح کرنے کے لیے، B16F10 خلیوں کی میلانین مواد اور انٹرا سیلولر ٹائروسینیز کی سرگرمی کو اسی ارتکاز کی حد میں پرکھا گیا۔ انجیر میں نتائج۔ 2 اور 3 نے اشارہ کیا کہ 10-HDA نے B16F10 خلیوں میں میلانین کی ترکیب پر کوجک ایسڈ کے مقابلے میں زیادہ روک تھام کی سرگرمی کی نمائش کی۔ ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ 10- HDA B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔

میلانوجینیسیس پر کم از کم تین ریگولیٹری پروٹینز کا غلبہ ہے، ٹائروسینیز، TRP1، اور TRP2 ممالیہ میلانوسائٹس [29] میں۔ TRP-1، TRP-2، اور MITF کے تاثرات سبھی B16F10 میلانوما سیلز میں روکے گئے تھے، جن کا علاج 10-HDA سے کیا گیا تھا۔ MITF میلانوجینک انزائمز، جیسے ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2 [42, 43] کے اظہار کو منظم کرنے کے لیے ایک اہم ٹرانسکرپشن عنصر ہے۔ ہمارے مغربی بلوٹنگ ڈیٹا (تصویر 4) کے مطابق، 10-ایچ ڈی اے کے ساتھ علاج کیے جانے والے ممالیہ کے خلیے تمام شرح کو محدود کرنے والے خامروں کے اظہار کو کم کر دیں گے، بشمول ٹائروسینیز، ٹی آر پی-1، اور ٹی آر پی-2 ، اور melanogenesis عمل کے دوران میلانین کے غیر معمولی جمع ہونے کو روکتا ہے۔ ان اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ 10- HDA MITF اظہار کو روک کر میلانوجینیسیس کے عمل کو روک سکتا ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے یہ ظاہر کیا ہے کہ 10-HDA MITF پروٹین، ٹائروسینیز، اور میلانین کی پیداوار کو کم کرکے میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔ MITF اظہار پر 10-HDA کا روک تھام کا راستہ دوسرے میلانوجینیسیس انحیبیٹرز سے مختلف تھا، جیسے کوجک ایسڈ، آربوٹین، اور ایسکوربک ایسڈ، جس نے MITF اظہار کو متاثر نہیں کیا [44, 45]۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ 10-HDA میں فنکشنل کاسمیٹکس کے لیے محفوظ اور قدرتی جلد کو سفید کرنے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال کرنے کی بہترین صلاحیت ہے [46]۔

میلانوما، ایک جلد کا کینسر میلانوسائٹس کے مہلک ٹرانس سے پیدا ہوتا ہے۔ دائمی طور پر دھوپ سے خراب ہونے والی جلد، بلغم کی سطحوں اور ایکریل جلد میں پیدا ہونے والے میلانوما زیادہ ایکٹیویٹ BRAF اور NRAS [47]، CDKN2A لوکس [48] کے نقصان، MITF [49] سے زیادہ، زیادہ ایکٹیویٹ کٹ [50] کی وجہ سے پیدا ہوتے ہیں۔ ]، زیادہ فعال mGluR1 [51, 52]… وغیرہ۔ اس مطالعہ میں، 10-HDA B16F10 میلانوما خلیوں میں MITF اظہار کو روک سکتا ہے۔ اس نے اشارہ کیا کہ 10-HDA میں جلد کی دوا یا میلانوما کے خلاف کینسر کے خلاف جزو بننے کی صلاحیت ہے۔

RJ کو جلد کی تازگی، جلد کی تخلیق نو، پھر سے جوان ہونے، ٹھیک کرنے کے لیے جلنے، یا زخم کو بھرنے سمیت بہت سے ڈرمیٹولوجیکل تیاریوں کے لیے استعمال کیا گیا ہے [53، 54]۔ مزید برآں، یہ اطلاع دی گئی کہ RJ میں کچھ غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈ میلانین کی ترکیب اور ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روک سکتے ہیں، جس سے میلانجینیسیس کی کمی واقع ہو سکتی ہے [55]، اور ہم نے یہ ظاہر کیا کہ RJ کا depigmentation اثر {{3} کی موجودگی کا نتیجہ ہو سکتا ہے۔ }}ایچ ڈی اے۔ چونکہ چوہوں کی جلد انسانوں سے ملتی جلتی ہے، اس لیے ہم نے چوہوں کو ایک ان ویوو اینیمل ماڈل کے طور پر استعمال کیا تاکہ {{4}HAD کی ڈپگمنٹنگ سرگرمی کی جانچ کی جاسکے۔ جیسا کہ تصویر 5 میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول کے مقابلے میں، 10-HAD کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں جلد کی رنگت کی سفیدی کے اشاریہ میں نمایاں اضافہ ہوا تھا۔ اس کے علاوہ، Koya-Miyata et al. 10-فبروبلاسٹ سیل لائنوں میں ایچ ڈی اے کی کولیجن کی پیداوار کو فروغ دینے والی سرگرمی کا جائزہ لے رہے تھے جو ٹرانس فارمنگ گروتھ فیکٹر تیار کرتے ہیں- 1 (TGF- 1)، جو کولیجن کی پیداوار کے لیے ایک اہم عنصر ہے [55] . لہذا، 10-HDA جلد کی تخلیق نو اور ہائپر پگمنٹیشن کے علاج کے لیے ایک بہت ہی امید افزا قدرتی مرکب معلوم ہوتا ہے۔

نتیجہ

10-HDA نے B16F10 میلانوما سیلز میں MITF کو دبا کر نہ صرف ٹائروسینیز کی سرگرمی بلکہ میلانوجینک انزائم ایکسپریشنز کو بھی روکا، بشمول ٹائروسینیز، TRP-1، اور TRP-2۔ اس کے نتیجے میں، میلانین کا روغن B16F10 میلانوما خلیوں میں کم ہو گیا تھا۔ مزید برآں، ان ویوو اینیمل ماڈل نے ٹاپیکل ایپلی کیشن میں 10-HDA کی ڈیپگمنٹنگ سرگرمی کو ظاہر کیا۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ 10-HDA کے پاس ایک امیدوار ہے جو کاسمیٹکس کی صنعت کے لیے ایک محفوظ اور قدرتی میلانوجینیسیس روک سکتا ہے، جس میں جلد کی دیکھ بھال کی ایک بہتر مصنوعات تیار کرنے کے لیے قدرتی اور موثر مرکب کی تلاش ایک اہم مقاصد میں سے ایک ہے۔ .

مخففات

10-HDA: 10-hydroxy-2-decanoic acid; BSA: بوائین سیرم البومین؛ ڈی ایم ای ایم: ڈلبیکو کا تبدیل شدہ ایگل میڈیم؛ DMSO: ڈائمتھائل سلفوکسائڈ؛ EDTA: Ethylenediaminetetraacetic acid؛ L-DOPA: L-3,4- dihydroxyphenylalanine; MITF: مائکروفتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن عنصر؛ MRJP: بڑے رائل جیلی پروٹین؛ MTT: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide; پی بی ایس: فاسفیٹ بفر نمکین؛ PMSF: فینائل میتھین سلفونائل فلورائیڈ یا فینیلمیٹائل سلفونائل فلورائیڈ؛ TLC: پتلی پرت کرومیٹوگرافی؛ TRP-1: ٹائروسینیز سے متعلق پروٹین 1؛ TRP- 2: ٹائروسینیز سے متعلق پروٹین 2

اعترافات

ہم شاہی جیلی تیار کرنے پر فو-چانگ شہد کی مکھیوں کی پالنے والی محترمہ لی یو لی کا شکریہ ادا کرتے ہیں

فنڈنگ

اس کام کو سائنس اور ٹیکنالوجی کی وزارت، تائیوان، ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 اور MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 سے گرانٹ سے تعاون حاصل تھا۔ سی سی پینگ)۔

ڈیٹا اور مواد کی دستیابی

اس مطالعہ کے دوران تیار کردہ یا تجزیہ کردہ تمام ڈیٹا اس شائع شدہ مضمون اور اس کی اضافی معلوماتی فائلوں میں شامل ہیں۔

مصنفین کی شراکتیں۔

سی سی پی نے تجربات کو تصور کیا اور ڈیزائن کیا۔ HZS اور IPL نے تجربات کئے۔ CCP اور PCK نے ڈیٹا کا تجزیہ کیا۔ سی سی پی، پی سی کے، اور جے سی ایل نے ری ایجنٹس/مٹیریلز/تجزیہ ٹولز کا تعاون کیا۔ سی سی پی اور آئی پی ایل نے پیپر لکھا اور اس پر نظر ثانی کی۔ تمام مصنفین نے مخطوطہ کے حتمی ورژن کی منظوری دی۔

مصنفین کی معلومات

سی سی پی، بائیوٹیکنالوجی میں ڈاکٹر، نیشنل فارموسا یونیورسٹی کے شعبہ بائیو ٹیکنالوجی میں ایسوسی ایٹ پروفیسر۔ HZS، بایو ٹکنالوجی میں ماسٹر، نیشنل فارموسا یونیورسٹی کے شعبہ بائیو ٹیکنالوجی سے گریجویٹ۔ آئی پی ایل، بائیو ٹیکنالوجی میں ڈاکٹر، ریسرچ اینڈ ڈویلپمنٹ ڈیپارٹمنٹ میں منیجر، چیلنج بائیو پروڈکٹس کمپنی، لمیٹڈ PCK، ڈاکٹر کیمسٹری، ایسوسی ایٹ پروفیسر ڈیپارٹمنٹ آف بائیو ٹیکنالوجی، نیشنل فارموسا یونیورسٹی۔ جے سی ایل، ہنی بی ٹاؤن کمپنی لمیٹڈ میں جنرل منیجر۔

اخلاقیات کی منظوری

جانوروں کے تمام تجربات کو نیشنل فارموسا یونیورسٹی کی اخلاقیات کمیٹی (منظوری نمبر: 10,401) نے منظور کیا تھا اور لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے رہنما اصولوں کے مطابق تھے۔

اشاعت کے لیے رضامندی۔

اس سیکشن میں لاگو نہیں ہے۔ یہ مضمون ایک طبی مطالعہ نہیں ہے جس میں انسانی شرکاء شامل ہیں اور اس نسخے میں کوئی انفرادی طبی ڈیٹا شامل نہیں ہے۔

مسابقتی مفادات

مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کی کوئی مسابقتی دلچسپی نہیں ہے۔

پبلیشر کا نوٹ

Springer Nature شائع شدہ نقشوں اور ادارہ جاتی وابستگیوں میں دائرہ اختیار کے دعووں کے بارے میں غیر جانبدار رہتا ہے۔

مصنف کی تفصیلات

1 ڈیپارٹمنٹ آف بائیو ٹیکنالوجی، نیشنل فارموسا یونیورسٹی، ہیوئی، یونلن، تائیوان۔ 2 شعبہ تحقیق اور ترقی، چیلنج بائیو پروڈکٹس کمپنی، لمیٹڈ، ڈولیو، یونلن، تائیوان۔ 3 Honey Bee Town Co., Ltd.، نمبر۔{3}} Huaxi, 970 Hualien City, Taiwan۔

موصول ہوا: 9 مارچ 2017 قبول کیا گیا: 21 جولائی 2017

آن لائن شائع ہوا: 09 اگست 2017

حوالہ جات

1. چن سی، چن ایس. پروٹین کے اجزاء میں تبدیلی اور مختلف حالات میں رائل جیلی کی سٹوریج استحکام۔ فوڈ کیم۔ 1995؛ 54:195-200۔

2. تاکیناکا T. شاہی جیلی کی کیمیائی ساخت۔ شہد کی مکھی سائنس 1982؛ 3:69-74۔

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. شہد کی مکھی Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci کے بڑے شاہی جیلی پروٹین کا ایک خاندان۔ 1998؛ 54:1020-30۔

4. Okamoto I، Taniguchi Y، Kunikita T، Kohno K، Iwaki K، Ikeda M. میجر رائل جیلی پروٹین 3 وٹرو اور ویوو میں مدافعتی ردعمل کو تبدیل کرتا ہے۔ لائف سائنس. 2003؛ 1:2029-45۔

5. Fujiwara S, Imai J, Fujiwara M, Yaeshima T, Kawashima T, Kobayashi K. رائل جیلی میں ایک طاقتور اینٹی بیکٹیریل پروٹین۔ جے بائیول کیم۔ 1990؛ 265:11333–7۔

6. بلیکووا جے، ہینس جے، نوردھوف ای، سینجر ڈبلیو، کلوڈینی جے، سموتھ جے اپیسمین، شہد کی مکھی (Apis Mellifera L.) شاہی جیلی سے ایک نیا سیرین ویلائن سے بھرپور پیپٹائڈ: طہارت اور سالماتی خصوصیات۔ FEBS Lett. 2002؛ 528:125-9۔

7. Townsend GF، Brown WH، Felauer EE، Hazlett B. فیٹی ایسڈز کی ان وٹرو اینٹیٹیمر سرگرمی پر مطالعہ۔ چہارم ایسڈز کے ایسٹرز کا قریبی تعلق ماؤس لیوکیمیا کے خلاف رائل جیلی سے 10- ہائیڈروکسی-2-ڈیکانوک ایسڈ سے ہے۔ کین جے بائیو کیم فزیول۔ 1961؛ 39:1765-70۔

8. Blum MS, Novak AF, Taber S. 10-Hydroxy-2Δ-decanoic acid، ایک اینٹی بائیوٹک جو رائل جیلی میں پایا جاتا ہے۔ سائنس 1959؛ 130:452–3۔

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. رائل جیلی سے الگ تھلگ فیٹی ایسڈز وٹرو میں ڈینڈریٹک سیل ثالثی مدافعتی ردعمل کو ماڈیول کرتے ہیں۔ انٹ امیونو فارماکول۔ 2007؛ 7:1211–20۔

10. ویور این، لا جے ایچ۔ رائل جیلی سے فیٹی ایسڈ کی متفاوتیت۔ فطرت 1960؛ 188:938-9۔

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. رائل جیلی کے لیے تازگی کے پیرامیٹر کے طور پر (E)-10-ہائیڈرو آکسائیڈز اینوک ایسڈ کی تشخیص۔ فوڈ کیم۔ 2003؛ 80:85-9۔

12. Takeshi N، Reiji I. تیاری اور پانی کے عرق اور شاہی جیلی کے الکلائن ایکسٹریکٹ کی فعال خصوصیات۔ فوڈ کیم۔ 2004؛ 84:181–6۔

13. Takeshi N، Mizuho S، Rriji I، Hachiro I، Nobutaka S. کچھ تجارتی شہد، رائل جیلی، اور ایک قسم کے پودے کی اینٹی آکسیڈیٹیو سرگرمیاں۔ فوڈ کیم۔ 2001؛ 75: 237–40۔

14. Martos MV، Navajas YR، López JF. شہد، پروپولیس اور رائل جیلی کی فنکشنل پراپرٹیز۔ جے فوڈ سائنس۔ 2008؛ 73:117-24۔

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. شہد کی مکھیوں کی مصنوعات انسانی نال کی رگوں کے اینڈوتھیلیل خلیوں میں VEGF سے متاثر انجیوجینیسیس کو روکتی ہیں۔ بی ایم سی کمپلیمنٹ الٹرن میڈ۔ 2009؛ 9:1-10۔

16. Tamura T، Fujii A، Kuboyama N. رائل جیلی (RJ) کے اینٹیٹیمر اثرات۔ نیپون یاکوریگاکو زشی۔ 1987؛ 89:73-80۔

17. پارک ایچ ایم، چو ایم ایچ، چو وائی، کم ایس وائی۔ رائل جیلی اوورییکٹومی کے بعد چوہے کی جلد میں کولیجن کی پیداوار کو بڑھاتی ہے۔ جے میڈ فوڈ۔ 2012؛ 15:568–75۔ doi:10.1089/jmf۔ 2011.1888۔

18. Izuta H, Shimazawa M, Tsuruma K, Araki Y, Mishima S, Hara H. شہد کی مکھیوں کی مصنوعات انسانی نال کی رگوں کے اینڈوتھیلیل خلیوں میں VEGF سے متاثر انجیوجینیسیس کو روکتی ہیں۔ بی ایم سی کمپلیمنٹ الٹرن میڈ۔ 2009؛ 6:489-94۔

19. Tseng JM، Huang JR، Huang HC، Tzen JTC، Chou WM، Peng CC۔ ایک مصنوعی تیل جسم کے نظام کے ذریعے ایک antimicrobial peptide-Royalisin اور اس کے اینٹی باڈی کی سہولت پر مبنی پیداوار۔ بائیو ٹیکنالوجی پروگرام 2011؛ ​​27:153–61۔

20. Bílikova K, Huang SC, Lin IP, Šimuth J, Peng CC. رائلائزنگ کی ساخت اور antimicrobial سرگرمی کا تعلق، Apis Mellifera کی رائل جیلی سے ایک antimicrobial peptide۔ پیپٹائڈس 2015؛ 68:190–6۔

21. Okuda H, Kameda K, Morimoto C, Matsuura Y, Chikaki M, Jiang M. رائل جیلی میں انجیوٹینسن کو تبدیل کرنے والے انزائم کی طرف انسولین جیسے مادوں اور روکنے والے مادوں کا مطالعہ۔ مٹسوباچی کاگاکو۔ 1998؛ 19:9-14۔

22. Shinoda M، Nakajin S، Oikawa T، Sato K، Kamogawa A، Akiyama Y. رائل جیلی میں vasodilative عنصر پر بائیو کیمیکل اسٹڈیز۔ یاکوگاکو زشی۔ 1978؛ 98:139-45۔ 23. Vittek J. تجرباتی جانوروں اور ایتھروسکلروسیس والے انسانوں میں سیرم لپڈس پر رائل جیلی کا اثر۔ تجربہ کار۔ 1995؛ 51:927–35۔

24. ابراہیم اے، الدائم ایم اے، عبد الدائم ایم ایم۔ چوہوں میں سب کرونک سسپلٹین زہریلا کے خلاف شہد کی مکھی کے شہد اور رائل جیلی کا نیفرو پروٹیکٹو اثر۔ سائٹو ٹیکنالوجی۔ 2016؛ 68:1039–48۔

25. ہان ایس ایم، ییو جے ایچ، چو وائی ایچ، پاک ایس سی۔ رائل جیلی Tyrosinase اظہار کے ڈاون ریگولیشن کے ذریعے میلانین کی ترکیب کو کم کرتی ہے۔ ایم جے چن میڈ۔ 2011; 39:1253–60۔

26. گلکریسٹ بی اے، ایلر ایم ایس۔ ڈی این اے فوٹوڈیمیج میلانوجینیسیس اور دیگر فوٹو پروٹیکٹو ردعمل کو متحرک کرتا ہے۔ J Investig Dermatol Symp Proc. 1999؛ 4:35–40۔

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME. میلانوجینیسیس میں سگنلنگ راستے۔ Int J Mol Sci. 2016؛ 17:1144۔ doi:10.3390/ijms17071144۔

28. Kobayashi T, Vieira WD, Potter B, Sakai C, Imokawa G, Hearing VJ. EU سے pheomelanogenesis میں سوئچ کے دوران میلانوجینک پروٹین ایکسپریشن کی ماڈیولیشن۔ جے سیل سائنس 1995؛ 108:2301-9۔

29. Kim SS, Kim MJ, Choi YH, Kim BK, Kim KS, Park KJ, Park SM, Lee NH, Hyun G. Down-regulation of tyrosinase, TRP-1, TRP-2 اور MITF مورین B16 F10 میلانوما میں سائٹرس پریس کیک کے اظہار۔ ایشین پی اے سی جے ٹراپ بائیو میڈ۔ 2013؛ 3: 617–22۔

30. لینڈ EJ، Ito S، Wakamatsu K، Riley PA. eumelanogenesis کے پہلے دو کیمیائی مراحل کے لیے مستقل کی درجہ بندی کریں۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2003؛ 16:487-93۔

31. ین ایف ایل، وانگ ایم سی، لیانگ سی جے، کو ایچ ایچ، لی سی ڈبلیو۔ فائلا نوڈی فلورا ایکسٹریکٹ سے میلانوجینیسیس انحیبیٹرز۔ ایویڈ بیسڈ کمپلیمنٹ الٹرنیٹ میڈ 2012؛ ID: 867494۔ doi 10.1155/2012/867494۔

32. Tachibana M. MITF: روغن کے خلیات کے لیے بہنے والی ایک ندی۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2000؛ 3:230-40۔

33. جنگ ایس او، کم ڈی ایچ، سون جے ایچ، نم کے سی، آہن ڈی یو، جو سی آر۔ انڈے کی زردی فاسویٹن کی فنکشنل پراپرٹی میلانوجینیسیس روکنے والے کے طور پر۔ فوڈ کیم۔ 2012؛ 135: 993–8۔

34. Yeon HK، Youn OJ، Cho CW، Son DW، Park SJ، Rho JH، Sang YC۔ جلد میں میلانین بائیو سنتھیسز پر Cinnamic ایسڈ کے روکنے والے اثرات۔ بائول فارم بیل۔ 2008؛ 31:946–8۔

35. لیو جے آر، یانگ وائی سی، شی ایل ایس، پینگ سی سی۔ رائل جیلی کی اینٹی آکسیڈنٹ خصوصیات لاروا کی عمر اور کٹائی کے وقت سے وابستہ ہیں۔ جے ایگری فوڈ کیم۔ 2007؛ 56: 11447–52۔

36. کارمائیکل جے، ڈی گراف ڈبلیو جی، گزدار اے ایف، مینا جے ڈی، مچل جے بی۔ ٹیٹرازولیم کی بنیاد پر نیم خودکار رنگین میٹرک پرکھ کی تشخیص: کیموسی حساسیت کی جانچ کا اندازہ۔ کینسر ریس 1987؛ 47:936–42۔

37. Bilodeau ML, Greulich JD, Hullinger RL, Bertolotto C, Ballotti R, Andrisani O. MP-2 مختلف میلانوسائٹس میں ٹائروسینیز جین کے اظہار اور میلانوجینیسیس کو متحرک کرتا ہے۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2001؛ 14:328-36۔

38. Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes D, Solano F, Lonzano JA, JC CB. B16/F10 ماؤس میلانوما خلیوں میں ٹیومر نیکروسس فیکٹر الفا کے ذریعہ میلانوجینیسیس کی روک تھام کا طریقہ کار۔ یور جے بائیو کیم۔ 1998؛ 255: 139-46۔

39. ڈنگ ایچ وائی، چانگ ٹی ایس، شین ایچ سی، تائی ایس کے۔ Cynanchum Bungei سے Murine tyrosinase inhibitors اور وٹرو اور vivo depigmenting سرگرمی کی تشخیص۔ ایکسپ ڈرمیٹولوجی۔ 2011؛ ​​20:720–4۔

40. تاکیواکی ایچ، سیرپ جے۔ سوریاٹک تختیوں کے کلر پیرامیٹر کی پیمائش نارو بینڈ ریفلیکشن سپیکٹرو فوٹومیٹری اور ٹرسٹیمولس کلورمیٹری کے ذریعے۔ سکن فارماکول۔ 1994؛ 7:145-50۔

41. منٹگمری ڈی سی۔ ایک عنصر کے ساتھ تجربات: تغیر کا تجزیہ۔ تجربات کے ڈیزائن اور تجزیہ میں۔ منٹگمری، ڈی سی، ایڈز، جان ولی اینڈ سنز، نیویارک، 1991؛ 75-77۔

42. Park HY, Wu C, Yonemoto L, Murphy-Smith M, Wu H, Stachur CM. MITF- ثالثی CAMP-حوصلہ افزائی پروٹین kinase Cb اظہار انسانی melanocytes میں۔ بائیو کیم جے 2006؛ 395:571–8۔

43. Goding CR. نیورل کرسٹ سے میلانوما تک ایم آئی ٹی ایف: میلانوسائٹ نسب میں سگنل کی نقل و حمل اور نقل۔ جینز دیو۔ 2000؛ 14:1712-28۔

44. کم ڈی ایس، پارک ایس ایچ، کوون ایس بی، لی کے، یون ایس ڈبلیو، پارک کے سی۔ (−)-Epigallocatechin-3- gallate اور hinokitiol MITF کی پیداوار میں کمی کے ذریعے میلانین کی ترکیب کو کم کرتے ہیں۔ آرچ فارم ریس 2004؛ 27:334-9۔

45. Choi YK، RhoYK، Yoo KH، Lim YY، Li K، Kim BJ. وٹامن سی بمقابلہ ملٹی وٹامن کے میلانوجینیسیس پر اثرات: وٹرو اور ویوو میں تقابلی مطالعہ۔ انٹرن جے ڈرمیٹول۔ 2011؛ ​​49:218-26۔

46. ​​Dynek JN، Chan SM، Liu J، Zha J، Fairbrother WJ، Vucic D. Microphthalmia سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر میلانوما میں apoptosis کے melanoma inhibitor کا ایک اہم ٹرانسکرپشن ریگولیٹر ہے۔ کینسر ریس 2008؛ 68:3124–32۔

47. Curtin JA, Fridlyand J, Kageshita T, Patel HN, Busam KJ, Kutzner H, Cho KH, Aiba S, Bröcker EB, LeBoit PE, Pinkel D, Bastian BC. میلانوما میں جینیاتی تبدیلیوں کے الگ الگ سیٹ۔ این انگل جے میڈ۔ 2005؛353(20):2135–47۔

48. Chan SH, Lim WK, Scott T Michalski ST, Lim JQ, NDB, Met-Domestici M, Young CNC, Vikstrom K, Esplin ED, Fulbright J, Ang MK, Wee J, Sittampalam K, Farid M, Lincoln SE, Itahana K, Abdullah S, The BT, Ngeow J. Germline hemizygous deletion of CDKN2A–CDKN2B لوکس ایک مریض میں جس میں Li–Fraumeni سنڈروم موجود ہے۔ این پی جے جینومک میڈیسن۔ 2016; doi:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. ہارٹ مین ایم ایل، میلانوما میں Czyz M. MITF: اس کے اظہار اور سرگرمی کے پیچھے میکانزم۔ سیل مول لائف سائنس۔ 2015؛ 72:1249–60۔ doi:10.1007/s00018-014- 1791-0۔

50. Antonescu CR, Busam KJ, Francon TD, Wong GC, Guo T, Agaram NP, Besmer P, Jungbluth A, Gimbel M, Chen CT, Veach D, Clarkson BD, Paty PB, Weiser MR. مقعد میلانوماس میں L576P KIT اتپریورتن KIT پروٹین کے اظہار کے ساتھ منسلک ہے اور مخصوص کناز کی روک تھام کے لیے حساس ہے۔ انٹ جے کینسر۔ 2007؛ 121:257-64۔

51. Abdel-Daim M، Funasaka Y، Komoto M، Nakagawa Y، Yanagita E، et al. میٹابوٹروپک گلوٹامیٹ ریسیپٹر ذیلی قسم 1 کی فارماکوجینومکس اور ویوو مہلک میلانوما کی تشکیل میں۔ جے ڈرمیٹول۔ 2010؛ 37:635–46۔

52. Ohtani Y، Harada T، Funasaka Y، Nakao K، Takahara C، et al. Metabotropic glutamate receptor subtype-1 melanoma کی vivo میں ترقی کے لیے ضروری ہے۔ آنکوجین۔ 2008؛ 27:7162–70۔

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. رائل جیلی انسانی ڈرمل فائبرو بلاسٹس کی منتقلی کو بڑھاتی ہے اور ان وٹرو زخموں کو ٹھیک کرنے والے ماڈل میں کولیسٹرول اور اسفنگنائن کی سطح کو تبدیل کرتی ہے۔ نیوٹر ریس پریکٹس۔ 2010؛ 4:362–8۔

54. Fujii A, Kobayashi S, Kuboyama N, Furukawa Y, Kaneko Y, Ishihama S, Yamamoto H, Tamura T. اسٹریپٹوزوٹوسن ذیابیطس چوہوں میں رائل جیلی (RJ) کے ذریعے زخم بھرنے میں اضافہ۔ جے پی این جے فارماکول۔ 1990؛53:331–7۔

55. Koya-Miyata S, Okamoto I, Ushio S, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. رائل جیلی کے نچوڑ اور اس کے ممکنہ طریقہ کار سے کولیجن کی پیداوار کو فروغ دینے والے عنصر کی شناخت۔ بایوسی بائیوٹیکنول بائیو کیم۔ 2004؛ 68:767–73۔

مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501