رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

گردے کے اپکلا ٹارگٹڈ مائٹوکونڈریل ٹرانسکرپشن عنصر کی کمی کے نتیجے میں شدید سسٹک بیماری سے وابستہ ترقی پسند مائٹوکونڈریل کمی ہوتی ہے--حصہ اول

کین ایشی^1,2,11 ET رحمہ اللہ تعالی

غیر معمولی مائٹوکونڈریل فنکشن شدید اور دائمی کی ایک اچھی طرح سے پہچانی جانے والی خصوصیت ہے۔گردہ بیماریاں. میں مائٹوکونڈریا کے کردار کے بارے میں بصیرت حاصل کرنے کے لیےگردہہومیوسٹاسس اور روگجنن، ہم نے مائٹوکونڈریل ٹرانسکرپشن فیکٹر A (TFAM) کو نشانہ بنایا، ایک پروٹین جو مائٹوکونڈریل ڈی این اے ریپلیکشن اور ٹرانسکرپشن کے لیے ضروری ہے جو مائٹوکونڈریل ماس اور فنکشن کی دیکھ بھال میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ میں خلل مائٹوکونڈریل فنکشن کے نتائج کا جائزہ لینے کے لیےگردہاپکلا خلیات، ہم نے سائن اوکولس سے متعلق ہومیو باکس میں TFAM کو غیر فعال کیا 2- اظہارگردہپروجینیٹر خلیات. TFAM کی کمی کے نتیجے میں مائٹوکونڈریل جین کے اظہار میں نمایاں طور پر کمی واقع ہوئی، مائٹوکونڈریل کی کمی، نیفران کی پختگی کی روک تھام، اور شدید بعد از پیدائش سسٹک بیماری کی نشوونما، جس کے نتیجے میں قبل از وقت موت واقع ہوئی۔ اس کا تعلق غیر معمولی مائٹوکونڈریل مورفولوجی، آکسیجن کی کھپت میں کمی، اور گلائکولٹک بہاؤ میں اضافہ سے تھا۔ مزید برآں، ہم نے پایا کہ ٹی ایف اے ایم کا اظہار مورین اور انسانوں میں کم ہوا تھا۔پولیسیسٹک گردے، جو مائٹوکونڈریل کمی کے ساتھ تھا۔ اس طرح، ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ TFAM اظہار کی بے ضابطگی اور مائٹوکونڈریل کمی کی سالماتی خصوصیات ہیں۔گردہسسٹک بیماری جو اس کے روگجنن میں حصہ ڈال سکتی ہے۔

مطلوبہ الفاظ: glycolysis; گردے کی ترقی؛ مائٹوکونڈریا؛پولی سسٹک گردے کی بیماری; ٹی ایف اے ایم

cistancheکے لیے اچھا ہےپولی سسٹک گردے کی بیماری

ترجمہی بیان

میں مائٹوکونڈریل ڈیسفکشن کے کردار کو سمجھنے کے لیے ہم نے ماؤس جینیات کا استعمال کیا ہے۔گردہہومیوسٹاسس سائن اوکولس سے متعلق ہومیو باکس 2 اپیٹیلیل پروجنیٹر سیلز میں مائٹوکونڈریل ٹرانسکرپشن فیکٹر A (TFAM) کے غیر فعال ہونے کے نتیجے میںگردوںناکامیشدید کی وجہ سےpolycystic گردے بیماری. ہمارے نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ ترقی پسند مائٹوکونڈریل dysfunction عیب دار اپکلا تفریق سے وابستہ ہے اورگردوںcystogenesis. مزید برآں، ہم نے قائم کیا کہ TFAM اظہار اور مائٹوکونڈریل نمبر انسان میں کم ہو گئے تھے۔polycystic گردےٹشو. ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ علاج کی حکمت عملی، جس کا مقصد مائٹوکونڈریل صحت کو بہتر بنانا ہے، آٹوسومل غالب کے مریضوں کے علاج میں فائدہ مند ہو سکتا ہے۔polycystic گردےبیماری.

Mitochondrial (mt) dysfunction عام کی ایک اچھی طرح سے تسلیم شدہ پیتھولوجک خصوصیت ہےگردہ بیماریاںاور سیلولر چوٹ، سوزش، اور فائبروسس کو متحرک کر سکتا ہے۔گردہ، نلی نما اپکلا خلیات آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن (OXPHOS) سے پیدا ہونے والے اڈینوسین ٹرائی فاسفیٹ (ATP) پر بہت زیادہ انحصار کرتے ہیں کیونکہ وہ متعدد توانائی استعمال کرنے والے اپیٹیلیل ٹرانسپورٹ کے افعال انجام دیتے ہیں۔ لہذا، موثر mt ATP کی پیداوار کو برقرار رکھنا گردے کے عام کام اور نظامی الیکٹرولائٹ ہومیوسٹاسس کے لیے ضروری ہے۔ اس کے علاوہ، حالیہ شواہد اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ مائٹوکونڈریا کا جین ریگولیشن، سیلولر سگنلنگ، اور خلیے کی تفریق میں درمیانی میٹابولائٹس اور ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کے ذریعے ایک اہم کردار ہے۔گردہبیماریاںاچھی طرح سے نہیں سمجھا جاتا ہے.

میں mt فنکشن کی تحقیقات کے لیےگردوںہومیوسٹاسس اور روگجنن، ہم نے مائٹوکونڈریل ٹرانسکرپشن فیکٹر A (TFAM) کو نشانہ بنایا۔ ٹی ایف اے ایم ایک جوہری انکوڈ شدہ عنصر ہے جو mt فنکشن، mt کاپی نمبر کی دیکھ بھال، اور mt DNA کے ساختی استحکام کے لیے ضروری ہے کیونکہ یہ mt جینوم کی نقل اور نقل کو پروموٹر DNA کو موڑنے کے ذریعے منظم کرتا ہے۔ جن میں سے سانس کی زنجیر کمپلیکس کے پروٹین ذیلی یونٹس کو انکوڈ کرتا ہے، 22 انکوڈ ٹرانسفر RNAs، اور 2 رائبوسومل RNAs. MT-CYB)، mitochondrially encoded cytochrome c oxidase subunit 1 (MT-CO1) اور mitochondrially encoded ATP synthase membrane subunit 6 (MTATP6)۔3,5 TFAM کے بغیر، خلیات OXPHOS کے ذریعے ATP پیدا کرنے کی اپنی صلاحیت کھو دیتے ہیں، mgenergen کی قابل قدر مقدار نہیں کھا سکتے۔ ROS، اور بتدریج مائٹوکونڈریا کا خاتمہ ہو جاتا ہے۔ 6–9 جینیاتی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ TFAM عام ایمبریوجنسیس کے لیے ضروری ہے کیونکہ عالمی ہوموزائگس Tfam غیر فعال ہونے کے نتیجے میں انٹرا یوٹرائن ہوتا ہے۔ برانن کے دن 10.5 کے ذریعے مہلکیت، جب کہ ہیٹروزیگس کی کمی، اگرچہ اس نے mt کاپی نمبر میں ~ 40 فیصد کمی کی اور سانس کی زنجیر کی کمی کا باعث بنی، تاہم برانن کی مہلکیت کا باعث نہیں بنی۔ سیلولر تفریق اور ٹشو ہومیوسٹاسس میں ترقی پسند ایم ٹی dysfunction کا۔ Tfam کے سیل قسم کے مخصوص مشروط غیر فعال ہونے نے تجویز کیا کہ OXPHOS اور/یا mt ROS جنریشن سیلولر تفریق، فنکشن، اور عام فزیالوجی کے لیے اہم ہے۔6–10

جوہری یا mt جین کی تبدیلیوں کی وجہ سے پرائمری mt کی خرابی اس کے ساتھ پیش آسکتی ہے۔گردہ بیماریسب سے زیادہ عام طور پر نلی نما چوٹ یا الگ تھلگ نلی نما dysfunction کے طور پر ظاہر ہوتا ہے۔گردوںبیماری کی اطلاع نہیں دی گئی ہے. ابھی حال ہی میں، کم TFAM اظہار کو دائمی سے منسلک کیا گیا ہے۔گردہبیماری. Tfam کے غیر فعال ہونے کی وجہ سے mt کی سالمیت کا نقصان tubulointerstititial بیماری اورگردوں ناکامیچوہوں میں، جو جزوی طور پر mt DNA تناؤ سے متاثر سائکلک GMP-AMP سنتھیس (cGAS) - انٹرفیرون جینز کے محرک (STING) پر منحصر سوزش کے ردعمل کی وجہ سے تھا۔

یہاں ہم یہ اطلاع دیتے ہیں کہ سائن اوکولس سے متعلق ہومیوباکس 2 (SIX2) میں مشروط Tfam غیر فعال ہونے والے چوہوں میں نیفرون پروجینیٹر سیلز15 کا اظہار کرتے ہوئے شدید سسٹک بیماری پیدا ہوتی ہے اور اس سے قبل از وقت مر جاتے ہیں۔گردوںناکامینوجوان نوعمر چوہوں کی طرح۔Tfam^-/- چوہوں کو نیفران کی پختگی میں نقائص کی خصوصیت تھی، جو کہ mt کی کمی، OXPHOS میں کمی، اور میٹابولک تبدیلی میں گلائکولائسز کی طرف متوجہ تھے۔Tfam^-/- گردوںاپکلا میں سسٹک بیماری کی شدت کو دیکھتے ہوئےTfam^-/- چوہوں، ہم نے ماؤس کے 2 ماڈلز کا تجزیہ کیا۔polycystic گردےبیماری(PKD)، جس کا نتیجہ یا تو پولی سسٹین میں تغیرات کا نتیجہ ہے-1 (PKD(پولی سسٹک گردے کی بیماری)1) یا cystin-1 (Cys1)، نیز آٹوسومل ڈومیننٹ پولی سسٹک کڈنی ڈیزیز (ADPKD) کے مریضوں کے انسانی ٹشوز۔ ہم اسے قائم کرتے ہیں۔Tfam^-/- murine اور انسانی PKD دونوں سے cysts میں غیر منظم ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)ٹشوز. ایک ساتھ مل کر، ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ TFAM dysregulation اور mt depletion کی خصوصیات ہیں۔گردوںسسٹک امراض اور ان کے روگجنن میں معاون کردار ہو سکتا ہے۔

cistancheکے لیے اچھا ہےپولی سسٹک گردے کی بیماری

نتائج

SIX2 نسب کے خلیوں میں Tfam غیر فعال ہونے کے نتیجے میں شدید سسٹک بیماری پیدا ہوتی ہے۔گردوںناکامیمیں mt فنکشن کی تحقیقات کرنے کے لیےگردوںاپیتھیلیم میں، ہم نے Tfam کو SIX2- میں ظاہر کرنے والے پروجینیٹر سیلز کو غیر فعال کیا، جو کہ جمع کرنے والی نالی (CD) کے علاوہ تمام نیفران سیگمنٹس کو جنم دیتے ہیں۔ سکس2 پروموٹر (شکل 1a) کے ٹرانسکرپشن کنٹرول کے تحت ایک بڑھا ہوا سبز فلوروسینٹ پروٹین/Cre ریکومبینیز فیوژن پروٹین (eGFP/Cre)۔چھ{{0}eGFP/Cretg/^{ٹی جی پلس}; Tfam^fl/fl) یہاں سے چھ کے طور پر کہا جاتا ہے2-Tfam^-/- اتپریورتی چھ2-Tfam^-/- چوہے متوقع مینڈیلین تناسب پر پیدا ہوئے تھے اور پیدائش کے وقت بصری معائنہ کے ذریعہ کر لیٹر میٹ کنٹرول سے ممتاز نہیں تھے۔ تاہم، چھ کے درمیان جسمانی وزن میں فرق2-Tfam^-/- اتپریورتی اور کری لیٹر میٹ کنٹرولز بعد از پیدائش کے دن (P) 14 (5.7 جمع -0.3 جی اتپریورتیوں کے لیے بمقابلہ 7.5 جمع -0.3 جی کنٹرولز کے لیے، n=4 ہر ایک، P =0.004؛ ضمنی جدول S1)۔ چھ2-Tfam^-/- اتپریورتی چوہوں کی خصوصیت بڑھی ہوئی تھی۔گردےکنٹرول کے مقابلے میں (گردہ/جسمانی وزن کا تناسب 1.45 فیصد جمع -0.19 فیصد اتپریورتیوں کے لیے بمقابلہ 0.60 فیصد جمع - 0.02 فیصد کنٹرول کے لیے، n {{8} } ہر ایک، پی <0.001؛ شکل="" 1b،="" ضمنی="" جدول="" s1)="" اور="" p20="" اور="" p30="" (شکل="" 1b)="" کی="" عمر="" کے="" درمیان="" فوت="" ہوا۔="" اتپریورتی="" گروہ="" میں="" نوعمر="" مہلکیت="" سے="" وابستہ="">گردوںناکامی16 کے مقابلے اتپریورتی چوہوں کے لیے خون میں یوریا نائٹروجن کی سطح 68.40 کے علاوہ -5.32 ملی گرام/ڈی ایل کے ساتھ شدید سسٹک بیماری سے۔{5}}۔ n= 6 اور 7، بالترتیب؛ P < 0.0001؛="" شکل="" 1b="" اور="" c)۔="" مزید="" برآں،="" چھ2-tfam="" mutants="" نے="" نمایاں="" البومینوریا="" تیار="" کیا="" (پیشاب="" البومین/کریٹینائن="" کا="" تناسب="" 43.58="" پلس="" -362.475.18="" mg/g="" چھ="" میں2-tfam="" mutants="" بمقابلہ="" 3.39="" mg/g="" کنٹرول="" میں="" بالترتیب="" p14،="" n="6" اور="" 10="" پر؛="" p=""><0.0001)۔ یہ="" six2="" نیفران="" پروجینیٹر="" سیلز="" میں="" cre="" recombinase="" کے="" ایکسپریشن="" پیٹرن="" سے="" مطابقت="" رکھتا="" ہے،="" جو="" کیپ="" mesenchyme="" کو="" جنم="" دیتا="">گردوںنلیاں اور پوڈوکیٹس۔ 15 چھ کے برعکس2-Tfam^-/- اتپریورتی، SIX2 پروجینیٹر خلیوں میں ہیٹروزائگس Tfam کی کمی کے ساتھ چوہے عام طور پر تیار ہوئے، زرخیز تھے، اور واضح طور پر نشوونما نہیں کرتے تھے۔گردہبیماری(ضمنی شکل S1)۔

تصویر 1|SIX2 نسب کے خلیوں میں Tfam غیر فعال ہونے کے نتیجے میں شدید سسٹک بیماری اور گردوں کی ناکامی ہوتی ہے۔ (a) Tfam floxed ایلیل کے اندر تجرباتی نقطہ نظر اور ھدف شدہ ترتیب کے مقام کی وضاحت کرنے والا منصوبہ۔ لیٹر میٹ کنٹرول (Cre ) اور سکس سے الگ تھلگ کل جینومک کڈنی ڈی این اے کا پولیمریز چین ری ایکشن تجزیہ2-Tfam^-/-چوہوں کی عمر کے بعد پیدائش کے دن (P) 7؛ غیر دوبارہ ملانے والے Tfam floxed allele کو 2-lox (2) سے ظاہر کیا جاتا ہے؛ recombined allele by 1-lox، جنگلی قسم کے ایللی بذریعہ wt؛ þ یا - سکس2-eGFP/Cre ٹرانسجن کی موجودگی یا غیر موجودگی کی نشاندہی کریں۔ (ب) بائیں پینل، کری کنٹرول سے گردوں کی تصاویر اور چھ2-Tfam^-/- P20 کی عمر میں چوہے گردے کے وزن (KWs) کو جسمانی وزن (BW) (n= 4–14) کے فیصد کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ دائیں پینلز، خون میں یوریا نائٹروجن (BUN) کی سطح Cre littermate کنٹرول (co) اور چھ2-Tfam^-/-P7 کی عمر میں چوہے (بالترتیب n=7 اور 6) اور کپلان-میئر بقا کے منحنی خطوط برائے Cre کنٹرول اور چھ2-Tfam^-/- لاگ رینک ٹیسٹ (n=10–13) کے مقابلے چوہوں کا۔ (c) کری کنٹرول اور سکس سے فارملین فکسڈ، پیرافین ایمبیڈڈ کڈنی سیکشنز کی نمائندہ تصاویر2-Tfam^-/-P7 اور P29 کی عمر میں چوہے ہیماتوکسیلین اور eosin (H&E) سے داغے ہوئے ہیں اور امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعے ایک ہموار پٹھوں کے ایکٹین (ACTA2) اور کلسٹر تفریق (CD) اینٹیجن 31 کے لیے تجزیہ کیا گیا ہے۔ تعداد کے آثار سسٹک ڈھانچے کو ظاہر کرتے ہیں اور ستارے گلومرول کو ظاہر کرتے ہیں۔ پورے گردے کے کراس سیکشنز کے لیے بار ¼ 1 ملی میٹر، ہائی پاور ایچ اینڈ ای امیجز کے لیے 100 ملی میٹر، اور IHC امیجز کے لیے 50 ملی میٹر۔ ڈیٹا کو اوسط جمع - SEM کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے اور اس کا تجزیہ 2-ٹیلڈ اسٹوڈنٹ کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے کیا جاتا ہے۔ *** پی <0.001۔ اس="" تصویر="" کو="" دیکھنے="" کو="" بہتر="" بنانے="" کے="" لیے،="" براہ="" کرم="" www.kidney-international.org="" پر="" اس="" مضمون="" کا="" آن="" لائن="" ورژن="">

چھ کا تجزیہ2-Tfam^-/- چوہوں، جس نے ROSA26-ACTB-tdTomato,-eGFP Cre رپورٹر ایلیل کا اظہار بھی کیا، جس کو یہاں سکس2-mT/mG کہا جاتا ہے۔Tfam^-/- چوہوں، اس بات کا اشارہ کرتے ہیں کہ سسٹک ڈھانچے کی اکثریت میںTfam^-/- گردے چھ2-eGFP/Cre اظہار کی تاریخ والے خلیوں سے اخذ کیے گئے تھے (ضمنی شکل S2)۔ چھ میں سسٹس2-Tfam^-/- گردےپھیلاؤ کے ثبوت دکھائے جیسا کہ کی67-مثبت سسٹ استر اپکلا خلیات کی موجودگی سے ظاہر ہوتا ہے (تمام سسٹ لائننگ اپیتھیلیل سیلز کا اوسطاً w40 فیصد)، جبکہ کلیویڈ کیسپیس 3 کے لیے مثبت خلیات سسٹوں کے اندر نہیں پائے گئے (ضمنی شکل S3) )۔ یہ نتائج چھ2- میں فاسفوریلیٹڈ ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کناز (p-ERK) اور بی-کیٹنین کی سطح کے ساتھ مطابقت رکھتے ہیں۔Tfam^-/- گردے کے ٹشو (ضمنی شکل S3)۔ ایک ساتھ لیا جائے تو ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ چھ2-Tfam^-/- گردے سالماتی خصوصیات کی نمائش کرتے ہیں جن سے اکثر وابستہ ہوتے ہیں۔گردوںسسٹک امراض.

تصویر 3 |Tfam^-/-سسٹس عام نیفران طبقہ کے مخصوص مارکر کا اظہار نہیں کرتے ہیں۔ (a) چھ2-mT/mG سے فارمیلین فکسڈ، پیرافین ایمبیڈڈ گردے کے حصوں کی نمائندہ تصاویر؛Tfam^-/-mice at age postnatal day (P) 14 stained for enhanced green fluorescent protein (eGFP), megalin, uromodulin, thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter (NCC), and aquaporin 2 (AQP2) by immunofluorescence (IF). 4',6-diamidino-2-phenylindole was used for nuclear staining (blue fluorescence). Arrows depict tubular structures expressing respective nephron segment-specific markers. Nephron segment marker expression was assessed in cysts with a maximal diameter of >50 ملی میٹر (b) چھ2-mT/mG سے فارمیلین فکسڈ، پیرافین ایمبیڈڈ گردے کے حصوں کی نمائندہ تصاویر؛Tfam^-/-P14 کی عمر میں چوہوں کو IF کے ذریعے eGFP اور uromodulin کے لیے داغ دیا گیا ہے۔ نجمہ intraluminal uromodulin کے ساتھ cysts کو ظاہر کرتا ہے۔ intraluminal uromodulin کی موجودگی کی جانچ سسٹس میں کی گئی جس کا زیادہ سے زیادہ قطر 50-100 تھا۔μm یا زیادہ سے زیادہ قطر میں 100 ملی میٹر سے بڑے سسٹوں میں۔ بارز=(a,b) 100 ملی میٹر۔ اس تصویر کو دیکھنے کو بہتر بنانے کے لیے، براہ کرم اس مضمون کا آن لائن ورژن دیکھیںwww.kidney-international.org۔

cistancheکے لیے اچھا ہےگردہ

Nephron کی پختگی سکس2-Tfam میں خراب ہے۔^-/-چوہوں

چونکہ بافتوں سے متعلق Tfam کے غیر فعال ہونے سے چوہوں میں پیتھالوجی پیدا ہونے میں کئی ہفتوں تک کا وقت لگ سکتا ہے، 17 کے بعد ہم نے ٹائم کورس کا جائزہ لیا۔گردوںچھ میں بیماری کی نشوونما2-Tfam^-/-چوہوں. ہم نے P0، P7 اور P14 کی عمر میں کنٹرول اور اتپریورتی چوہوں سے گردے اکٹھے کیے اور ہسٹولوجک طریقے، امیونو فلوروسینس (IF) سٹیننگ، اور مجموعی طور پر جین کے اظہار کا تجزیہ استعمال کیا۔گردہتشخیص کے لیے اقتباسات۔ IF SIX2 اور E-cadherin کے لیے P0 کی عمر میں داغ لگنے سے ظاہر ہوتا ہے کہ گردے کنٹرول سے اور چھ2-Tfam^-/-ہسٹولوجیکل طور پر ایک جیسے تھے۔ کارٹیکل نیفروجینک زون کے ڈھانچے کی تشکیل، جیسے کہ SIX2þ cap mesenchyme، E-cadherin– ظاہر کرنے والے ureteric tips، اور نوزائیدہ نیفرون ڈھانچے جیسےگردوںvesicles اور کوما کے سائز کے اور S کے سائز والے جسموں کو سکس میں بلاک نہیں کیا گیا تھا2-Tfam^-/-گردے (شکل 2a)۔ یہ ہسٹولوجک نتائج نیفروجینک مارکر کو انکوڈنگ کرنے والے جینوں کے اظہار کی سطح کے مطابق تھے۔ سکس 2، پیئرڈ باکس 2 (پیکس 2)، ایل آئی ایم ہومیو باکس پروٹین 1 (Lhx1)، اور اسپلٹ نما ٹرانسکرپشن فیکٹر 1 (Sall1) mRNA لیولز کنٹرول اور سکس کے درمیان نمایاں طور پر مختلف نہیں تھے2-Tfam^-/- مجموعی طور پر چوہوںگردہP0 سے ہم آہنگگردے(شکل 2b)۔ اس نے تجویز کیا کہ SIX2 نیفرون پروجینٹرز میں TFAM غیر فعال ہونے نے نیفروجینک ڈھانچے کی تشکیل کو نمایاں طور پر متاثر نہیں کیا۔

اگرچہ نوزائیدہ نیفران کے ڈھانچے کی تشکیل کو روکا نہیں گیا تھا، لیکن ایلسیئن بلیو/پیریوڈک ایسڈ – شیف اور لوٹس ٹیٹراگونولوبس لیکٹین کے ساتھ داغ دھبے نے چھ میں عیب دار ٹرمینل نیفران کی پختگی کی نشاندہی کی2-Tfam^-/-چوہے P{{0}} کی عمر میں۔ Alcian blue/periodic acid–Schiff، جو نلی نما تہہ خانے کی جھلیوں اور برش بارڈر پر داغ لگاتا ہے، اور لوٹس ٹیٹراگونولوبس لیکٹین، جو کہ قربت والے نلی خلیوں کے برش بارڈر میں مخصوص اولیگوساکرائڈز کی نشاندہی کرتا ہے، دونوں میں اتپریورتی گردوں میں کمی واقع ہوئی تھی۔ شکل 2c ایلسیئن بلیو/پیریوڈک ایسڈ دکھاتا ہے- P0، P7، اور P14 ٹائم پوائنٹس پر شِف سٹیننگ۔ P{{10}}، P7، اور P14 ٹائم پوائنٹس پر ولمس ٹیومر 1 پروٹین کے لیے لوٹس ٹیٹراگونولوبس لیکٹین ہسٹو کیمسٹری اور IF سٹیننگ کو ضمنی شکل S4 میں دکھایا گیا ہے۔ P0 کی عمر میں، لوٹس ٹیٹراگونولوبس لیکٹین کے ساتھ مثبت طور پر داغدار رشتہ دار علاقہ 2.10 فیصد، 0.51 فیصد اور {{30}.39 فیصد تھا۔ P7 کی عمر میں 0.1 فیصد بمقابلہ 6.25 فیصد 0.28 فیصد اور 6.2 فیصد 1.1 فیصد کنٹرولز کے لیے، بالترتیب (n ¼ 3–4، P ¼ 0.0004 اور 0.0007، بالترتیب؛ ضمنی اعداد و شمار S4)۔ ان ہسٹولوجک نتائج سے ہم آہنگ گلوومیرولر اور نیفرون طبقہ کے مخصوص مارکر پوڈوسن، نیفرین، ایکواپورین 1 (Aqp1)، سوڈیم فاسفیٹ کوٹرانسپورٹر 2a (NaPi2a)، uromodulin، codiumpotassoride (codium-phosphate cotransporter 2a (NaPi2a) کو انکوڈنگ کرنے والے جینز کے اظہار میں نمایاں کمی ہے۔ Nkcc2)، اور thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter (Ncc) چھ میں2-Tfam^-/-چوہے (شکل 2b)۔ ایک ساتھ لے کر، یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ چھ2-Tfam^-/- گردےبالغ قربت نیفرون سیگمنٹس اور گلوومیرولی کی تعداد میں ترقی پسند کمی کو ظاہر کرتا ہے۔

چونکہ چھ2-eGFP/Cre سرگرمی کے نتیجے میں TFAM کی کمی والے کیپ mesenchyme-ماخوذ نیفرون سیگمنٹس ہوتے ہیں، ہم نے پیش گوئی کی ہے کہ CD اپکلا خلیات، جو ureteric bud-derived ہیں، کی پختگی چھ میں متاثر نہیں ہوگی{{2} }Tfam^-/-گردے اس تصور سے مطابقت یہ ہے کہ ڈولیچوس بائفلورس ایگلوٹینن کے ساتھ داغ لگنا، جو ڈسٹل ٹیوبول اور سی ڈی میں N-acetyl-D-galactose کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے، چھ میں Dolichos biflorus agglutinin–مثبت ڈھانچے کی نسبت زیادہ نمائندگی کی نشاندہی کرتا ہے2-Tfam^-/-گردے P7 کی عمر میں، Dolichos biflorus agglutinin کے لیے مثبت طور پر داغ دار علاقے 13.91 فیصد 0.9 فیصد اتپریورتیوں کے لیے کل رقبہ پر مشتمل تھے بمقابلہ 1.93 فیصد 0.1 فیصد کنٹرول کے لیے (n ¼ 3, P ¼ { {10}}.0002؛ ضمنی شکل S4)۔ سوڈیم چینل اپیٹیلیل 1 الفا سبونائٹ (Scnn1a) یا ایکواپورین 2 (Aqp2) کے mRNA اظہار، جو دونوں CD اپکلا خلیوں میں ظاہر ہوتے ہیں، کنٹرول کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم نہیں ہوا تھا (شکل 2b)۔ چھ کے برعکس2-Tfam^-/-گردے، ہومیوباکس B7 (HOXB7) پروجینیٹر سیلز میں Tfam کا غیر فعال ہونا، جو CD اپکلا خلیات کو جنم دیتے ہیں، جس کے نتیجے میں CD نیفران مارکر اظہار اور ہلکے نلی نما پھیلاؤ کا نقصان ہوتا ہے لیکن cystogenesis نہیں (ضمنی شکل S5)۔ ایک ساتھ لے کر، ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ SIX2 پروجینیٹر خلیوں میں TFAM فنکشن کا نقصان نوزائیدہ نیفران ڈھانچے کی نشوونما کو نہیں روکتا ہے بلکہ ٹرمینل نیفران کی پختگی کو روکتا ہے۔

Tfam^-/-سسٹوں میں عام نیفران سیگمنٹ مارکر کی کمی ہے۔

کی histogenetic اصل کی خصوصیت کے لئےTfam^-/- گردوںcysts، ہم نے IF کا تجزیہ کیا۔Tfam^-/- گردےat age P14 and examined the expression of nephron segment markers megalin (proximal tubule), uromodulin (medullary thick ascending limb of Henle), thiazide sensitive sodium chloride cotransporter (distal tubule), and aquaporin 2 (CD). The majority of cysts with a maximal diameter of >50 mm did not express these segment-specific markers, indicating a lack of cellular differentiation (Figure 3a, Supplementary Figure S6). Furthermore, approximately 50% of cysts with a maximal diameter of >50 ملی میٹر کی خصوصیت uromodulin کے intraluminal ذخائر سے کی گئی تھی، جس نے نیفران کے حصوں سے قربت والی نلی اور ہینلے (شکل 3b) کے نزول لوپ کی طرف اشارہ کیا تھا۔

ایم ٹی فنکشن اور مورفولوجی میں ترقی پسند غیر معمولیاتTfam^-/- اپکلا خلیات

Tfam کو حذف کرنے کے میٹابولک نتائج کے ٹائم کورس کو نمایاں کرنے کے لیے، ہم نے سب سے پہلے Tfam اور TFAM-ریگولیٹڈ mt-Co1، mt-Cyb، اور mt-Atp6 کی mRNA سطحوں کی جانچ کی۔Tfam^-/- گردےP0، P7، اور P14 کی عمر میں۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، Tfam، mt-Co1، mt-Cyb، اور mt-Atp6 mRNA کی سطح کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا (شکل 4a)۔Tfam^-/-eGFP (چھ{{0}}mT/mG؛ Tfam / چوہوں) کے ساتھ ٹیگ کردہ اپکلا خلیات نے MT-CO1 پروٹین ایکسپریشن میں نمایاں کمی کی نمائش کی (ضمنی شکل S7)۔ mt DNA کاپی نمبر میں 63 فیصد کمی کی گئی، جو mt کی کمی کے ساتھ مطابقت رکھتی ہے، TFAM کی کمی کی علامت (شکل 4a)۔ اس کے برعکس، نیکوٹینامائڈ اڈینائن ڈینیوکلیوٹائڈ کو انکوڈنگ کرنے والے جوہری جینوں کا اظہار: ubiquinone oxidoreductase core subunit 3 (Ndufs3) اور succinate dehydrogenase Complex flavoprotein subunit A (Sdha) P0 کی عمر میں متاثر نہیں ہوا تھا لیکن P0 کی عمر میں کم ہوا تھا اور P7 اور P74ig۔ mt جین اور پروٹین کے تجزیے سے یہ نتائج Tfam/epithelium میں mt کاپی نمبر کے بڑھتے ہوئے نقصان سے مطابقت رکھتے ہیں۔

اس کے بعد ہم نے P7 کی عمر میں الگ تھلگ پرائمری پروکسیمل ٹیوبول اپیٹیلیل سیلز (PTECs) میں Tfam غیر فعال ہونے کے میٹابولک اثرات کی تحقیقات کی۔Tfam^-/- PTECs نے بیسل آکسیجن کی کھپت کی شرحوں میں نمایاں کمی کی نمائش کی (4077 4.10 اتپریورتیوں کے لیے بمقابلہ 61۔{4}}.18 pmol/min/104 سیل برائے کنٹرول، n=3 ہر ایک، P =0.034)، ATP سے منسلک تنفس (33۔{12}}.91 اتپریورتیوں کے لیے بمقابلہ 46۔{15}}.91 pmol/min/104 سیل برائے کنٹرول، n{{18} } ہر ایک، P=0.093)، زیادہ سے زیادہ تنفس (116۔{22}}.19 اتپریورتیوں کے لیے بمقابلہ 225۔{25}}.55 pmol/min/104 سیل برائے کنٹرول، n{{ 28}} ہر ایک، P=0.005)، اور اضافی سانس لینے کی صلاحیت (76.{32}}.18 اتپریورتیوں کے لیے بمقابلہ 163۔{35}}.61 pmol/min/104 سیلز کنٹرولز کے لیے ، n =3 ہر ایک، P=0.003؛ شکل 4b)۔

ایم ٹی کی کمی اور نقصان کی ڈگری کو مزید نمایاں کرنے کے لیے، ہم نے جانچ کی۔Tfam^-/- گردےبذریعہ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی اور {{0}} جہتی ساختی روشنی مائیکروسکوپی (3D سم)۔ P7 کی عمر میں، مائٹوکونڈریا نے فاسد شکلوں اور غبارے کی نمائش کی، جو Tfam ناک آؤٹ چوہوں میں پچھلے نتائج کے مطابق ہیں۔ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپک تجزیہ نے اشارہ کیا کہ مائٹوکونڈریا کی ساختی اسامانیتاوں، جیسے بڑھے ہوئے سائز اور غیر معمولی کرسٹی، بعد از پیدائش ترقی کرتے ہیں کیونکہ اتپریورتیوں اور کنٹرول کے درمیان مورفولوجک فرق P0 کی عمر میں کم ظاہر ہوتے تھے اور عمر کے ساتھ زیادہ شدید ہوتے جاتے ہیں (شکل 4c )۔ 3D SIM کا استعمال mt والیوم اور نیٹ ورک سائز کو چھ2-mT/mG میں جانچنے کے لیے کیا گیا تھا۔ P7 کی عمر میں چھ2-mT/mG کنٹرول چوہوں کے مقابلے Tfam / mutants; mt حجم کو 5 سے 8 نلیاں فی سیکشن کے کراس سیکشنز میں ماپا گیا، 25 سے 40 eGFP-مثبت کارٹیکل اپیتھیلیل سیلز کی جانچ کی گئی جو IF سٹیننگ کے ذریعے وولٹیج پر منحصر anion-selective channel 1 کے لیے داغدار تھے۔ ہم نے پایا کہ فی eGFP مثبت سیل کے کل mt حجم میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے (6266 16.46 mm3/ سیل برائے اتپریورتی بمقابلہ 177۔{23}}.17 mm3 /cell برائے کنٹرول، n ¼ 3 ہر ایک P ¼ 0۔ 33}}.016 چھ میں زیادہ سے زیادہ mt نیٹ ورک کا سائز، جو جانچے گئے تمام eGFP-مثبت سیلز میں سامنے آنے والے سب سے بڑے mt نیٹ ورک کی پیمائش کرتا ہے، چھ میں کمی واقع ہوئی2-Tfam^-/- گردے(1432 23.2 mm3 برائے mutants بمقابلہ 318۔{5}}.45 mm3 کنٹرولز کے لیے، n ¼ 3 ہر ایک، P ¼ 0.0327)۔ ایک ساتھ مل کر، الٹراسٹرکچرل اور سم کے نتائج اور ایم ٹی جین اور پروٹین کے تجزیے سے حاصل ہونے والے نتائج ایم ٹی کاپی نمبر کے ترقی پسند نقصان کے ساتھ مطابقت رکھتے ہیں۔Tfam^-/- اپکلا

Cistancheکے لیے اچھا ہےپولی سسٹک گردے کی بیماری

TFAM کی کمی گردوں کے اپکلا میٹابولزم کو گلائکولیسس کی طرف لے جاتی ہے۔

میں PTECsگردہATP جنریشن کے لیے فیٹی ایسڈ بی آکسیڈیشن اور OXPHOS کا استعمال کریں اور گلوکونیوجینیٹک ہیں۔گردےچھ سے2-Tfam^-/-اور کر لیٹر میٹ چوہوں کو P7 کی عمر میں کنٹرول کرتا ہے۔ ہم نے پایا کہ گلائکولیسس میں شامل کلیدی ریگولیٹری جین، جیسے ہیکسوکینیز 2 (Hk2) اور enolase 2 (Eno2) کو الگ کردیا گیا تھا۔ اس کے برعکس، ٹرائی کاربو آکسیلک ایسڈ سائیکل میں شامل زیادہ تر جینوں کے اظہار میں کمی واقع ہوئی تھی (مثال کے طور پر، آئیسائٹریٹ ڈیہائیڈروجنیز 1 [آئی ڈی ایچ 1])، جیسا کہ فیٹی ایسڈ بی-آکسیڈیشن میں شامل جینوں کا اظہار تھا، جیسے کہ ایسیٹیل-کوینزائم اے ایسلٹرانسفریز 1 بی ( Acaa1b)، میڈیم چین acyl-coenzyme A dehydrogenase (Acadm) (Figure 5a اور b، سپلیمنٹری فگر S8)۔ ٹرائی کاربو آکسیلک ایسڈ سائیکل میں شامل جینوں کے اظہار میں کمی کے ساتھ مطابقت - آکسیڈیشن جین غیر جانبدار لپڈس کا جمع تھا جیسا کہ منجمد میں تیل کے سرخ O داغ سے پتہ چلاگردہP14 کی عمر میں حصے (شکل 5c)۔

مورین اور انسانی پی کے ڈی ٹشوز میں ٹی ایف اے ایم کا کم اظہار ایم ٹی کی کمی سے وابستہ ہے۔

کیونکہ چھ2-Tfam^-/- گردےPKD سے مضبوط مشابہت رکھتا ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری) گردے، ہم نے اگلا اندازہ کیا کہ آیا PKD میں TFAM کو غیر منظم کیا گیا تھا۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)ٹشوز ہم نے پہلے 2 اچھی طرح سے قائم جینیاتی PKD ماؤس ماڈلز میں TFAM اور TFAM ریگولیٹڈ جین ایکسپریشن کی جانچ کی۔ Tfam mRNA کی سطح کو Pkd سے پورے گردے کے ہوموجنیٹس میں نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا۔^-/- اور Cys^cpk/cpkچوہے، جو PKD1 میں سے کسی ایک میں تبدیلی لاتے ہیں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)یا Cys1۔ اس کا تعلق مائٹوکونڈریلی اور نیوکلیئر انکوڈڈ ایم ٹی جینز کے اظہار میں کمی کے ساتھ ساتھ غیر منظم گلائکولٹک جین اظہار کے ساتھ تھا۔ چھ کے مشابہ2-Tfam^-/-گردے, پی کے ڈی(پولی سسٹک گردے کی بیماری)^-/- اور Cys^cpk/cpk گردےایلیویٹڈ Eno2 اور Hk2 کی خصوصیت تھی اور فاسفوگلیسیریٹ کناز (Pgk) 1، پائروویٹ ڈیہائیڈروجنیز کناز (Pdk) 1، اور Pdk4 ٹرانسکرپٹ لیولز (شکل 6a) میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی۔ TFAM پروٹین ایکسپریشن، جیسا کہ IF سٹیننگ کا اندازہ لگایا گیا ہے، ملحقہ نان سسٹک نلیاں (شکل 6b) کے اپکلا خلیوں کے مقابلے میں سسٹ استر کے اپکلا خلیوں میں کم کیا گیا تھا۔ یہ سیٹو ہائبرڈائزیشن میں RNA فلوروسینس کے ذریعے کم mt-Co1 اور mt-Atp6 اظہار کے ساتھ منسلک تھا (شکل 6b، ضمنی اعداد و شمار S9)؛ mt حجم، جیسا کہ 3D SIM کے ذریعے طے کیا جاتا ہے، ملحقہ، نان سسٹک نلیوں یا عام کنٹرول سے PTECs کے اپکلا خلیات کے مقابلے میں 55 فیصد کم ہو گیا تھا۔گردے. نارمل کنٹرول PTECs اور noncystic tubules سے PTECs کے درمیان mt حجم میں فرق نہیں پایا گیا (شکل 6c)۔

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا TFAM اظہار کا نقصان انسانی PKD کی ایک عام سالماتی خصوصیت ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)، ہم نے امیونو ہسٹو کیمسٹری، IF سٹیننگ، سیٹو ہائبرڈائزیشن میں RNA فلوروسینس، اور 3D سم کے ذریعے 5 ADPKD مریضوں کے نیفریکٹومی نمونوں کا تجزیہ کیا۔ TFAM اظہار میں کمی 75.2 فیصد جمع -7.5 فیصد میں دیکھی گئیگردوںامیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعہ سسٹوں کا تجزیہ کیا گیا۔ یہ سیٹو ہائبرڈائزیشن میں RNA فلوروسینس کے ذریعہ MT-CO1 اور MT-ATP6 کے کم اظہار کے ساتھ منسلک تھا (شکل 7a، ضمنی شکل S10)؛ 3D سم (شکل 7b) کے ذریعہ اندازہ کے مطابق سسٹ استر اپکلا خلیوں میں mt حجم تقریبا 70 فیصد کم ہوا تھا۔ ایک ساتھ لیا گیا، 2 PKD کا تجزیہ(پولی سسٹک گردے کی بیماری)ماؤس ماڈل اور انسانی ADPKD ٹشوز نے تجویز کیا کہ TFAM کی کمی اور mt کی کمی PKD میں عام نتائج ہیں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)ٹشوز اور کے روگجنن کو متاثر کرنے کا امکان ہے۔گردوںسسٹک بیماری.

cistanche کے لئے اچھا ہےپولی سسٹک گردے کی بیماری

بحث

اس مضمون کے حصہ دوم کے بارے میں معلومات کے لیے یہاں کلک کریں۔

سے اقتباس:'گردہاپیتھیلیل ٹارگٹڈ مائٹوکونڈریل ٹرانسکرپشن فیکٹر ایک کمی کے نتیجے میں شدید سسٹک بیماری سے وابستہ ترقی پسند مائٹوکونڈریل کمی ہوتی ہے ' کین ایشی 1،2،11 ایٹ ال۔

---گردہبین الاقوامی (2021) 99، 657–670