چینی طب Cistanche کیمیکل ساخت اور جسم میں اجزاء کا تجزیہ Ⅲ

باب 2 Cistanche deserticola کی کیمیائی ساخت پر معیاری مطالعہ

Cistanche خشک کھجلی والے پتوں کا مانسل تنا ہے۔Cistanche deserticola YC.Maاور Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. یہ گردے یانگ کی پرورش کرنے والی روایتی چینی ادویات میں سے ایک ہے۔ اس کے افعال ہیں۔پرورش گردے - یانگجوہر اور خون کو بھرتا ہے اور نم کرتا ہے اس کا جلاب اثر ہوتا ہے اور اکثر نامردی، بانجھ پن، کمر اور گھٹنوں کے درد، پٹھوں اور ہڈیوں کی کمزوری، آنتوں کی خشکی اور قبض وغیرہ کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ ڈیمنشیا، پارکنسنز کی بیماری، دماغی اسکیمیا سے تحفظ، اور سیکھنے اور یادداشت کی صلاحیتوں میں بہتری۔ کے لئے مواد کی بنیاد کو واضح کرنے کے لئےCistanche deserticola کی تاثیریہ باب HPLC اور LC-IT-TOF-MS کا استعمال کرتا ہےCistanche کے کیمیائی اجزاء. مختلف قسم کے کیمیائی اجزاء کے کریکنگ قوانین کے منظم خلاصے کی بنیاد پر، Cistanche deserticola کی خصوصیات کا منظم طریقے سے تجزیہ کیا جاتا ہے۔ کیمیائی ساخت، کے لیے قابل اعتماد ذرائع سے بھرپور ڈیٹا فراہم کرناگہرائی سے وضاحتکی دواؤں کی خصوصیات میں سےCistanche deserticolaجاندار کےاندر.

CISTANCHE کو کام کرنے میں کتنا وقت لگتا ہے؟

سیکشن 1 تجرباتی مواد

1. ساز

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS مائع ماس سپیکٹرومیٹر (2 LC-20ADXR پمپ، SIL-20AC آٹومیٹک سیمپلر، CTO-20AC کالم اوون، SPD-M20A UV ڈیٹیکٹر سے لیس، DGU-20A3R آلودگی سے پاک کرنے والی گیس مشین، CBM-20ایک کنٹرولر، ESI آئن سورس، Shimadzu Company, Japan), Milli-Q الٹرا پیور واٹر پیوریفیکیشن سسٹم (ملی پور کمپنی، USA): Mettler ME204 الیکٹرانک تجزیاتی توازن ( Mettler Toledo کمپنی، سوئٹزرلینڈ)۔

2. ری ایجنٹس

کرومیٹوگرافی گریڈ اور ماس اسپیکٹومیٹری گریڈ میتھانول، ایسٹونیٹرائل اور ماس اسپیکٹرو میٹری گریڈ فارمک ایسڈ تھرمو فشر کمپنی (پٹسبرگ، PA، USA) سے خریدے گئے تھے۔ پانی ملی-کیو الٹرا پیور پانی تھا جو لیبارٹری میں بنایا گیا تھا (ملی پور، بیڈفورڈ، ایم اے، یو ایس اے)۔ باقی ری ایجنٹس تمام تجزیاتی گریڈ کے ہیں۔

Salidroside, 6-deoxycatalpol, 8-epi-loganic acid, echinacoside, acteoside, isoside Verbascoside (isoacteoside,) اور pinoresinol- -D-glucopyranoside (pinoresinol- -D-glucopyranoside) دونوں پیکنگ یونیورسٹی کی کلیدی لیبارٹری آف نیچرل اینڈ بائیومیمیٹک ڈرگز میں پروفیسر ٹو پینگفی کے ریسرچ گروپ نے فراہم کیے تھے۔ Sarcoside F ( cistanosideF) Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd, cistanoside A (cistanoside A), 2'-acetylacteoside (2'-acetylacteoside), 2'-acetylpoliumoside (2'-acetylpoliumoside), cistanoside Polyglucoside (cistanoside Polyglucoside) سے خریدا گیا تھا۔ )، cistanoside E (cistanosideE)، isocistanoside E (isocistanosideE)، cistanoside C (cistanosideC)، isocistanoside C (isocistanosideC) اور cistanoside D (cistanosideD) سبھی کو شنگھائی Shidande Biotechnology Co., Ltd, tubuloside A (tubuloside) سے خریدا گیا تھا۔ tubuloside B (tubulosideB) Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd سے خریدا گیا تھا۔

سیکشن 2 تجرباتی مواد

1. نمونہ کی تیاری

1.1 حوالہ مادہ کی تیاری

مندرجہ بالا "سیکشن 1 تجرباتی مواد" میں مختلف حوالہ جات کی مناسب مقدار کا وزن کریں اور DMSO کے ساتھ 10 ایم ایم اسٹاک سلوشن تیار کریں۔ ہر سٹاک محلول کے 2 ملی لیٹر کو ٹھیک ٹھیک پپیٹ کریں اور اسے 25% ایسٹونائٹرائل سے پتلا کر کے 2 μM مکسڈ کنٹرول سلوشن بنائیں۔ 1.2 ٹیسٹ کے حل کی تیاری

Cistanche deserticola کے آبی عرق کو ہماری لیبارٹری نے بنایا تھا، اور نمونے کو ماڈرنائزیشن ریسرچ سینٹر آف ٹریڈیشنل چائنیز میڈیسن، سکول آف ٹریڈیشنل چائنیز میڈیسن، بیجنگ یونیورسٹی آف چائنیز میڈیسن میں محفوظ کیا گیا ہے۔ Cistanche deserticola پاؤڈر 20 ملی گرام لیں، گھلنے کے لیے 40 ملی لیٹر پانی ڈالیں، بھنور اور مکس کریں، 10 منٹ کے لیے 10000 rpm پر سینٹری فیوج کریں، اور سپرناٹینٹ لیں۔ یعنی ٹیسٹ حل حاصل کیا جاتا ہے۔

3. ماس سپیکٹرو میٹری حالات

الیکٹرو اسپرے آئن سورس (ESI)، اسکیننگ موڈ مثبت اور منفی آئنوں کو بیک وقت اسکین کرنا ہے اور خود بخود ملٹی لیول ماس اسپیکٹومیٹری کو متحرک کرنا ہے۔ مثبت آئنوں کے لیے MS'~MS' کی بڑے پیمانے پر سکیننگ کی حد m/z50~800 ہے، اور منفی آئنوں کے لیے m/z100~1000 ہے۔ سپرے چیمبر کے وولٹیج بالترتیب 4.5kV اور -3.5kV ہیں: ایٹمائزنگ گیس (Nz) بہاؤ کی شرح 1.5Lmin ہے؛ خشک کرنے والی گیس کا دباؤ 110MPa ہے؛ پتہ لگانے کا وولٹیج 1.55 kV ہے؛ خمیدہ ڈیسولوینٹیزر ٹیوب (CDL) اور ہیٹنگ ماڈیول کا درجہ حرارت دونوں 200 ڈگری ہیں۔ تصادم کے چیمبر کا دباؤ 1.5e-Pa ہے؛ آئن ٹریپ پریشر 2.8e-Pa ہے؛ مثبت اور منفی پہلے مراحل کی تکرار کی تعداد 1 ہے، اور آئن جمع ہونے کا وقت 30 ms ہے۔ مثبت اور منفی دوسرے مراحل کی تکرار کی تعداد 2 ہے، اور آئن جمع ہونے کا وقت 20ms ہے۔ ; تصادم سے متاثرہ انحطاط (CID) توانائی 50% ہے۔

سیکشن 3 نتائج اور بحث

کالم کا انتخاب

بہتر کرومیٹوگرافک علیحدگی حاصل کرنے کے لیے، ہم نے مختلف مینوفیکچررز اور تصریحات، جیسے ACEUltraCore 2.5 SuperC8 کرومیٹوگرافک کالم (30x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography, Ltd. Technologies, Ltd. Shiseido Capcell Core Ci8 (2.1 mm x 150mm, 2.7μm)، Waters Acquity UPLC HSS T3 کالم (2.1 x 100 mm, 1.8 μm, Milford, MA, USA) اور Capcell Core ADME کالم (2.1x150mm, Shiseidom, 2.7μm, Corporation جاپان)۔ منظم موازنہ کے ذریعے، یہ پایا گیا کہ Capcell Core ADME کرومیٹوگرافک کالم (2.1x150mm, 2.7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan) استعمال کرتے وقت، ہر کرومیٹوگرافک سگنل کو بہتر طریقے سے الگ کیا جا سکتا ہے (شکل 3-1)۔

2. مائع مرحلے کے حالات کا انتخاب

کے اہم کیمیائی اجزاء کے بعد سےCistanche deserticolaphenylethanol glycosides، lignans، iridoids اور دیگر مرکبات ہیں، یہ عام طور پر منفی آئن حالات میں بہتر جواب دیتا ہے۔ Cistanche deserticola کے پانی کے عرق میں نچلے درجے کے کیمیائی اجزا کی نشاندہی کرنے کے لیے، یہ قیاس کیا جاتا ہے کہ طاقت کو بڑھانے کے لیے تیزاب کو موبائل فیز میں شامل کرنے کی ضرورت پڑ سکتی ہے۔ لہذا، اس تجربے میں واٹر میتھانول، واٹر-ایسیٹونیٹرائل، 0.1% فارمک ایسڈ واٹر میتھانول اور 0.1% فارمک ایسڈ واٹر-ایسیٹونیٹرائل کو تحقیقات کے لیے موبائل فیز سسٹم کے طور پر استعمال کیا گیا۔ یہ پایا گیا کہ 0.1% فارمک ایسڈ واٹر-ایسیٹونائٹرائل بہترین علیحدگی کا اثر رکھتا ہے، اچھی چوٹی کی شکل اور بڑی چوٹی کی صلاحیت کے ساتھ، اس لیے 0.1% فارمک ایسڈ واٹر اور ایسٹونائٹرائل کا انتخاب کیا گیا۔ موبائل مرحلہ. 3. کیمیائی اجزاء کا کوالٹیٹو تجزیہ۔ Cistanche deserticola میں مختلف قسم کے مرکبات کے ماس سپیکٹرو میٹری فریگمنٹیشن کے اصولوں کو دریافت کرنے کے لیے 19 موجودہ حوالہ جات کا استعمال کریں۔ مخلوط حوالہ مادہ ADME کالم پر 340 nm پر PDA کرومیٹوگرامس اور مثبت اور منفی آئن موڈ میں BPC چارٹ ہیں۔ تصویر 3-1 دیکھیں۔ ہم نے PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP، اور Wanfang، وغیرہ کے ذریعے متعلقہ لٹریچر کا جائزہ لیا، اور Cistanche deserticola کے کیمیائی اجزاء کا خود ساختہ ڈیٹا بیس بنایا۔ ماس اسپیکٹومیٹری فریگمنٹیشن قواعد اور معلوم مرکبات کے برقرار رکھنے کے اوقات کے موازنہ کی بنیاد پر، ہم نے ابتدائی طور پر Cistanche deserticola میں 45 مرکبات کی نشاندہی کی۔ مرکبات، بشمول 31 phenylethanol glycosides، 9 iridoids، 3 benzyl glycosides، اور 2 lignans، جیسا کہ جدول 3-1 میں دکھایا گیا ہے۔

رازداری کے وقت کا موازنہ کرتے ہوئے، MS' سپیکٹرم اور MS' حوالہ جات کے سپیکٹرم، مرکبات 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37,3 ترتیب وار درستگی کے طور پر جنیپین، cistanchein F، cistancheoside E، echinaceaside، chrysantoside، cistanchein A، tuberosin A، larchresinol 4-0- -D glucoside، mullein Glycosides، isocannabinoid glycoside، pinoresidemonice'، glycoside 2 glycoside C، isocistancoside C، tuberosin B، اور cistanche glycoside D.

یہ تجربہ HPLC-IT-TOF-MS ٹیکنالوجی کا استعمال کرتا ہے تاکہ Cistanche deserticola کے پانی کے عرق میں پیچیدہ کیمیائی اجزا کا تیزی سے اور درست طریقے سے تجزیہ کیا جا سکے، جو Cistanche deserticola کے جامع معیار کے تجزیہ اور vivo میں فارماسولوجیکل مادوں پر تحقیق کی بنیاد فراہم کرتا ہے۔

شکل 3-1 مخلوط حوالہ مادہ کرومیٹوگرام اوپر: مثبت آئن موڈ میں بی پی سی چارٹ: نیچے: منفی آئن موڈ میں بی پی سی چارٹ

شکل 3-1 مخلوط حوالہ مادہ کرومیٹوگرام اوپر: مثبت آئن موڈ میں بی پی سی چارٹ: نیچے: منفی آئن موڈ میں بی پی سی چارٹ