Leptospirosis گردے کی بیماری میں مائیکرو جانا Ⅱ

4. لیپٹوسپیرا ایس پی پی کے لیے مدافعتی ردعمل کی میزبانی کریں۔

لیپٹوسپیرا کا بنیادی راستہ خون، ٹشوز، پیشاب، یا آلودہ پانی کے ذریعے بلغمی جھلیوں یا کھلی ہوئی جلد کا براہ راست دخل ہے، جو نظامی گردش میں پھیلتا ہے اور کئی اعضاء میں پھیلتا ہے، جیسےجگر, پھیپھڑوں، اور proximal tubule کےگردوں میں نیفرون، جہاں یہ ایک ماہ تک بڑھ سکتا ہے اور زندہ رہ سکتا ہے [51]۔ انفیکشن کے ابتدائی مرحلے میں،پیدائشی مدافعتی ردعملleptospirosis میں دفاع کی پہلی لائن کے طور پر ایک بنیادی کردار ادا کرتا ہے، کے ردعمل کو متاثر کرتا ہے۔پیٹرن کی شناخت کے رسیپٹرز, macrophage phagocytosis, extracellular کی شمولیتنیوٹروفیل جمع، اورتکمیلی نظام کی مداخلت [52].

دیمدافعتی جوابانسانوں میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہےکلینیکل علامات کی ترقی، جیسا کہ کچھ روگجنک تناؤ کے وائرلینس عوامل کرتے ہیں۔ زیادہ تر انسانی لیپٹوسپائروسس غیر علامتی یا ہلکا ہوتا ہے، اور صرف 10 فیصد کیسز ملٹی آرگن کی ناکامی اور اموات کی شرح میں اضافے کے ساتھ شدید شکلیں پیدا کرتے ہیں۔سائٹوکائن طوفاناور مدافعتی فالج کی حیثیت۔ پیتھوجینک انواع بیکٹیریمیا کے مرحلے میں ایک مزاحیہ ردعمل کو متحرک کرتی ہیں، حالانکہ اس کے بعد کا رویہمدافعتی جوابغیر واضح ہے. لیپٹوسپائروسس کے متعدد طبی مظاہر کے ساتھ مریضوں کے مطالعے میں، طبی تصویر کی شدت کو مختلف سیرم سائٹوکائنز کی سطحوں، جیسے TNF-، IL-10، اور IL-6 [53] سے منسلک کیا گیا ہے، لیکن یہ نتیجہ متنازعہ رہتا ہے [54]۔ ان حالات کی وجہ سے عام طور پر مدافعتی ردعمل اور انفیکشن کے دوران ہونے والے حیاتیاتی واقعات کو سمجھنے میں دلچسپی بڑھ گئی ہے۔

CISTANCHE کو کام کرنے میں کتنا وقت لگتا ہے؟

4.1 لیپٹوسپیرا اور تکمیلی نظام

ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کے خلاف Leptospiral proteases کی proteolytic سرگرمی انفیکشن کو دوران خون میں داخل ہونے دیتی ہے۔ گردشی نظام میں تکمیلی نظام روگجنک لیپٹوسپیرا کے لیے پیدائشی مدافعتی ردعمل کا ایک اہم طریقہ کار ہے۔ تاہم، لیپٹوسپیرا نے مالیکیولز کی تکمیل کے لیے پروٹین کو پابند کرکے اور پروٹیز پیدا کرنے کے ذریعے تکمیلی نظام کے حملے سے بچنے کے لیے حکمت عملی تیار کی ہے، جیسا کہ تھرمولیسن، ایک تھرموسٹیبل نیوٹرل میٹالوپروٹینیز انزائم جو C3 پروٹین چین کو متاثر کرتا ہے۔ پیتھوجینک اسٹرینز بائنڈنگ فیکٹر H (FH)، تکمیلی عنصر H سے متعلقہ پروٹین 1 (FHR-1)، فیکٹر-H- نما پروٹین 1 (FHL-1)، اور C4b بائنڈنگ پروٹین (C4BP)، سبھی جن میں سے تکمیلی نظام کو روکنے کے لیے ذمہ دار ہیں [55]۔ میزبان تکمیلی ریگولیٹرز، میزبان پروٹیز، اور بیکٹیریل پروٹیز کی مداخلت کے ذریعے پیتھوجینک لیپٹوسپیرا [55,56] کی مکمل چوری کے لیے تین اہم حکمت عملی ہیں۔ تکمیلی ریگولیٹرز کے لیے، Leptospira فیکٹر H (FH؛ متبادل تکمیلی راستے کا ایک ریگولیٹر) اور C4 بائنڈنگ پروٹین (C4BP؛ کلاسیکی اور لیکٹین تکمیلی راستوں کا ایک ریگولیٹر) استعمال کرتا ہے تاکہ C3 کنورٹیسیس کے زوال کو تیز کیا جا سکے اور فیکٹر I کے لیے کوفیکٹرز کے طور پر بھی کام کیا جا سکے۔ C3b اور C4b [57,58] کی درار کے لیے۔ لیپٹو اسپائرل پروٹین (LcpA)، وٹرونیکٹین (Vn؛ ایک ٹرمینل پاتھ وے ریگولیٹر) کے ساتھ مل کر C9 کو باندھتا ہے اور اس کے پولیمرائزیشن کو روکتا ہے [59]، اس طرح ممکنہ طور پر جھلی کو متحرک کرنے والے کمپلیکس (MAC) کی تشکیل کو روکتا ہے [60]۔ مزید برآں، پیتھوجینک لیپٹوسپیرا کئی میزبان پروٹیزوں کو باندھتا ہے، جیسے یوروکیناز قسم کے پلازمینوجن ایکٹیویٹر (یو پی اے)، جو لیپٹوسپیرا کی سطح پر C3b، C4b، اور C5 کے عمل انہضام کے لیے فعال پلازمین [61] (ایک سیرین پروٹیز) کو آمادہ کرتا ہے [62]۔ مزید برآں، میٹالوپروٹیز اور تھرمولیسن، اینڈوجینس لیپٹوسپیرا پروٹیز، کئی تکمیلی پروٹینوں (C2، C3، C4، اور فیکٹر B) کو توڑ اور غیر فعال کر سکتے ہیں [60]۔ میزبان اور پیتھوجینک لیپٹوسپیرا سے تکمیلی ریگولیٹرز کا مجموعہ، میزبان کے ہدف والے اعضاء میں بیکٹیریل کالونائزیشن کی سہولت فراہم کرتا ہے [63]۔

4.2 لیپٹوسپیرا اور نیوٹروفیلز

انفیکشن کے دوران، لیپٹوسپیرا کی روگجنک نسلیں نیوٹروفیلز کی مضبوط سرگرمی اور سوزش کے حامی ردعمل کو متحرک کرتی ہیں۔ نیوٹروفیل مائکروجنزم کنٹرول کے لیے اہم ہیں، لیکن وہ میزبان میں ٹشو کو نقصان پہنچانے میں بھی حصہ ڈالتے ہیں۔ یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ گردش میں کم نیوٹروفیل سرگرمی کی وجہ سے ایکسٹرا سیلولر نیوٹروفیل جمع ہونے کی کم سطح لیپٹوسپائریمیا کو بڑھاتی ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ نیوٹروفیل بھرتیوں کی انٹراواسکولر تشکیل روگجنک لیپٹوسپیرا [64] کے ابتدائی پھیلاؤ کو روکنے میں اہم ہو سکتی ہے۔

4.3 لیپٹوسپیرا اور میکروفیجز

لیپٹوسپیرا انفیکشن کے ابتدائی مرحلے میں، میکروفیجز اسپیروچیٹ کے خاتمے میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ ایک موثر سائٹوکائن ردعمل کے ساتھ یہ اثر کرنے والا طریقہ کار phagocytic کنٹرول اور انفیکشن کے پھیلاؤ سے متعلق ہے، حالانکہ Leptospira spp۔ کو Fas/FasL-caspase-8/-3 راستے کے ذریعے میکروفیجز میں apoptosis کی حوصلہ افزائی کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے اور متاثرہ میں مائٹوکونڈریل عنصر پیدا کرنے والے apoptosis اور endonuclease کے جاری ہونے کی وجہ سے میزبان میں ان کی بقا اور پھیلاؤ کو آسان بناتا ہے۔ میکروفیجز [65]۔ حالیہ تحقیق لیپٹوسپیرا سے متاثرہ میکروفیجز کے مائیکرو ٹرانسکرپٹوم پر کی گئی ہے تاکہ ایپی جینیٹک میکانزم کا تعین کیا جا سکے، جیسا کہ آر این اے کے ذریعے پوسٹ ٹرانسکرپشن ریگولیشن۔ لیپٹوسپیرا سے متاثرہ میکروفیجز نے دکھایا ہے کہ مائیکرو آر این اے (miRNAs) کو اسپیروچیٹ کے انفیکشن کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے، یہ ظاہر کرتا ہے کہ یہ ضابطہ لیپٹوسپیرا انفیکشن [66] میں مدافعتی نظام کے ان خلیوں کے ردعمل میں انتہائی اہم ہے۔ انسانی میکروفیجز میں، رد عمل آکسیجن پرجاتیوں اور لیپٹوسپیرا انفیکشن کے ذریعے پیدا ہونے والی لیسوسومل کیتھیپسن B کے ذریعے ثالثی کی سوزش کے فعال ہونے میں NLRP3 اور IL-18 کی نمایاں سطحیں ہیں، جو IL کی پیداوار کے حق میں ہیں phagocytosis کا امکان اور کچھ cytokines کی تیز رفتار ماڈلنگ لیپٹوسپائروسس مزاحمت کے ساتھ منسلک ہے [67]۔

4.4 لیپٹوسپیرا پر مزاحیہ ردعمل

Leptospira کے خلاف مخصوص مزاحیہ ردعمل علامات کے آغاز کے تیسرے دن IgM اور IgG اینٹی باڈیز کی پیداوار سے نمایاں ہوتا ہے۔ اس کے علاوہ، IgA کی پیداوار پہلے دن سے انفیکشن کے بعد کے نویں مہینے تک رپورٹ کی گئی ہے۔ درحقیقت، لیپٹوسپائروسس کی ابتدائی تشخیص میں آئی جی ایم میں اضافے کو ایک متبادل اقدام کے طور پر استعمال کیا گیا ہے [68]۔ لیپٹوسپائروسس کے ساتھ انسانوں میں مزاحیہ ردعمل کا اثر قدرتی انفیکشن کے بعد سیرولوجیکل تشخیص کی اجازت دیتا ہے [69]۔ لیپٹوسپیرا انفیکشن میں مزاحیہ ردعمل کا سب سے اہم پہلو حفاظتی اینٹی باڈیز کی تشکیل ہو سکتا ہے۔ لیپٹوسپائروسس کے لیے فی الحال دستیاب ویکسین مکمل خلیوں کی تیاریوں پر مشتمل ہیں اور ان کی حدود ہیں، جیسے کم افادیت، متعدد ضمنی اثرات، کم مدافعتی یادداشت پیدا کرنا، اور سیروور کے فرق کے لیے کراس پروٹیکشن کی کمی۔ اس طرح، بیماری پر قابو پانے کے لیے نئی ویکسین کی تیاری ضروری ہے، اور فی الحال جینیاتی حفاظتی ٹیکوں سے ویکسین تیار کرنے کے لیے تحقیق کی جا رہی ہے [70]۔ لیپٹوسپیرا کے OMPs کو ایک اینٹیجن سمجھا جاتا ہے، جس میں B لیمفوسائٹس کے لیے بہتر مدافعتی صلاحیت ہوتی ہے، جس میں ساختی ایپیٹوپس OmpL187- 98، OmpL1173-191، OmpL1297-320، LipL4130-48، LipL4130-48 شامل ہیں۔ {9}}، اور LipL41263-282 [71]۔ یہ ایپیٹوپس یونیورسل ویکسین کی ترقی کے لیے امید افزا امیدوار ہیں۔

4.5 لیپٹوسپیرا کے لیے انکولی مدافعتی ردعمل: ٹی سیلز اور سائٹوکائنز

لیپٹوسپیرا کی پیتھوجینک انواع ٹی اور بی لیمفوسائٹس کے ذریعے مدافعتی ردعمل پیدا کرتی ہیں، جس کے ساتھ سائٹوکائنز کا اظہار ہوتا ہے جو کشش ثقل کے چارٹ سے منسلک ہو سکتے ہیں۔ لیپٹوسپیرا کے انفیکشن کے دوران ٹی سیلز کا فعال ہونا اشتعال انگیز ردعمل کا آغاز کرتا ہے، خاص طور پر سائٹوکائن کی پیداوار کے ذریعے۔ یہ انفیکشن کے ابتدائی خاتمے کے لیے اہم ہے، لیکن سوزش والی سائٹوکائنز کی بے قابو پیداوار کے نتیجے میں سائٹوکائن کی زیادہ پیداوار بھی ہو سکتی ہے جس کے بعد امیونو فالج کی حالت ہوتی ہے، جو سیپسس اور ملٹی آرگن کی ناکامی کا باعث بن سکتی ہے۔ ٹی لیمفوسائٹس IL-1، IL-6، IL-12، انٹرفیرون (IFN)-، اور TNF- پیدا کرتے ہیں، جو انفیکشن کی جگہ پر لیوکوائٹس کو بھرتی کرنے کے لیے کیمو-اٹریکٹنٹ کے طور پر کام کرتے ہیں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ سابق ویوو میں، پردیی خون کے مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) کی ثقافتوں میں پھیلے ہوئے δ T خلیے IL-17 اور IFN [72] پیدا کرنے کے ساتھ ساتھ لیپٹوسپیرا کے اینٹیجنز کے ساتھ متحرک ہوتے ہیں۔ مزید برآں، جبکہ لیپٹوسپائروسس سے متاثرہ جنگلی قسم کے چوہوں نے غیر متاثرہ چوہوں کے مقابلے میں IL-4، IL-10، اور IL-13 سمیت سائٹوکائنز کی کافی مقدار کا مظاہرہ کیا، لیپٹوسپیرا سے متاثرہ مورائن دائمی ورم گردہ (Daf1-/- چوہوں) نے ہموار پٹھوں کے ایکٹین، IL-10، IL-13 کا زیادہ اظہار دکھایا، لیکن IL-12 اور IL میں کوئی فرق نہیں{{21} } سطحیں [73]۔ اس طرح، Daf1 اور IL-17 CKD بڑھنے میں ایک اہم حفاظتی کردار ادا کر سکتے ہیں کیونکہ Leptospira-induced murine CKD کے ساتھ رینل فبروسس [72,73]۔ تاہم، بیماری کے بڑھنے میں منتخب سائٹوکائن ردعمل کا مفروضہ انسانی لیپٹوسپائروسس میں اب تک غیر نتیجہ خیز ہے۔ شدید لیپٹوسپائروسس اور پلمونری ملوث ہونے والے مریضوں میں، IL-6، CXCL8، اور IL-10 کی بلند سطحیں جب ہلکے لیپٹوسپائروسس [53] والے مریضوں کے مقابلے میں حاصل کی گئیں۔ لیپٹوسپائروسس کے مریضوں میں سائٹوکائنز کی یہ زیادہ تعداد شدید لیپٹوسپائروسس کی نشوونما میں ان کے کلیدی کردار کو نمایاں کرتی ہے۔

شدید انفیکشن والے مریضوں میں، CD4+ T لیمفوسائٹس جن میں سوزش کے حامی پروفائل اور IL-2 اور IFN- کے پروڈیوسر پائے جاتے ہیں جبکہ CD4+ CD25 IL-10 کے اعلی پروڈیوسر ہوتے ہیں۔ تقریبا غیر حاضر ہیں. T lymphocyte ثالثی مدافعتی ردعمل کا ضابطہ لیپٹوسپیرا کے سوزش کے ردعمل سے پیدا ہونے والے ٹشو کو پہنچنے والے نقصان کو روکنے کے لیے ظاہر نہیں ہوتا ہے۔ شدید لیپٹوسپائروسس والے انسانوں کی CD4+ T لیمفوسائٹس میں، TNF- اور دیگر سوزش والی سائٹوکائنز کی پیداوار بیماری کی ہلکی شکل والے لوگوں کی نسبت زیادہ ہوتی ہے، جو اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ ان سائٹوکائنز کو مارکر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ انفیکشن کے امیونولوجیکل مرحلے میں شدت [74]۔ IL-10 کی پیداوار لیپٹوسپائروسس کے ساتھ انسانوں میں موت کے خطرے سے وابستہ ہے۔ تاہم، بے نقاب اور غیر علامتی انسانوں پر کی گئی ایک تحقیق نے اس سائٹوکائن کی پیداوار کو سوزش کے ردعمل اور بقا کے کنٹرول سے منسلک کیا [74]۔ لیپٹوسپیرا انفیکشن کے دوران، سوزش کے ثالث اور کچھ لیوکوائٹ خلیات، جیسے ٹی لیمفوسائٹس، مزاحم افراد میں تیزی سے ریگولیٹ ہو جاتے ہیں، اس کے برعکس جو لیپٹوسپائروسس کی شدید شکلوں والے افراد میں ہوتا ہے [75]۔

خلاصہ یہ ہے کہ لیپٹوسپیرا انفیکشن کے خلاف مدافعتی ردعمل کو لیپٹوسپائروسس کے مریضوں کے طبی رویے کی وجہ سے پوری طرح سے نہیں سمجھا جاتا، جو بیکٹیریل جینوم کے مختلف وائرلیس عوامل کے ساتھ تعامل کرتے ہیں، جو لیپٹوسپیرا کو ایک ٹھوس روگجنک صلاحیت فراہم کرتا ہے۔

5. طبی توضیحات

لیپٹوسپائروسس کے طبی مظاہر متنوع ہیں، جن میں ہلکی، غیر مخصوص علامات، جیسے فلو جیسی علامات (بخار، مائالجیا، اور سر درد) سے لے کر آخری مرحلے کے اعضاء کی چوٹوں کے ساتھ شدید علامات تک (جیسے، AKI، شدید جگر کی ناکامی) ، اور خون بہہ جانے والا diathesis، جسے Weil's syndrome بھی کہا جاتا ہے)، pulmonary hemorrhage سے شدید hemoptysis، aseptic meningoencephalitis سے شدید الجھن، اور شدید یا subacute myocarditis [7] سے شدید دل کی ناکامی اس کے مطابق، مشتبہ لیپٹوسپائروسس انفیکشن کے تین اشارے پر مشتمل ہیں (i)شدید بخار کی بیماری، (ii) یرقان، اور (iii)شدید گردے کی چوٹ[12]۔ لیپٹوسپائروسس کی شدید شکل کے پیش گو ہیں شروع ہونے پر شدید مائالجیا، شدید خون بہنے کا رجحان، اور نشان زدہ یرقان۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ پہلے سے موجود یا تو کی موجودگیدائمی گردے کی بیماری(چھوٹے گردے کا سائز) یا انوریہ کے ساتھ بڑھے ہوئے، گنجان گردے کا تعلق بدترین نتائج سے ہے [12]۔ اس طرح، لیپٹوسپائروسس سے منسلک گردوں کی بیماری کے مریضوں کا فوری علاج کیا جانا چاہیے۔

6. تشخیص

6.1۔ کلینیکل تشخیص

لیپٹوسپائروسس کی تشخیص نمائش کی تاریخ، خطرے کے عوامل اور طبی علامات پر مبنی ہے۔ شک کا ایک اعلی اشاریہ بعد میں اعضاء کے نقصان کو روک سکتا ہے۔ تاہم، لیپٹوسپائروسس کی علامات کو اکثر ایکیوٹ فیبرائل سنڈروم کی دیگر وجوہات کے لیے غلط سمجھا جاتا ہے، جیسے ڈینگی انفیکشن، ملیریا، ہیپاٹائٹس، اور فعال آٹو امیون بیماری۔ لیپٹوسپائروسس کی پیتھوگنومونک علامات کی کمی کا مطلب یہ ہے کہ تشخیص عارضی طور پر ایک مقامی علاقے کے مریضوں میں بخار اور مائالجیا کی تشخیص پر مبنی ہے۔ اس وجہ سے لیپٹوسپائروسس کی لیبارٹری تشخیص ضروری ہے۔

6.2 لیبارٹری تشخیص

لیپٹوسپائروسس کی لیبارٹری میں تشخیص کرنا مشکل ہے، خاص طور پر شدید مرحلے کے دوران۔ یہ جسمانی رطوبتوں یا بافتوں میں اسپیروکیٹس یا ان کے اجزاء کی براہ راست شناخت کرکے، ثقافت میں لیپٹاسپائر کو الگ تھلگ کرکے، یا مختلف طبی مراحل میں مخصوص اینٹی باڈیز کا پتہ لگا کر انجام دیا جاسکتا ہے۔ لیپٹوسپائروسس کو بیماریوں سے الگ کرنا مشکل ہے، جیسے کہ ملیریا، ڈینگی بخار، رکیٹشیا، انفلوئنزا، ہیپاٹائٹس، اور زرد بخار اس کی مبہم طبی شکل کی وجہ سے۔ نتیجے کے طور پر، تشخیص کی تصدیق کے لیے لیبارٹری ٹیسٹ کی ضرورت ہوتی ہے۔ لیپٹاسپائرز، خود لیپٹوسپائرز، یا ان کے ڈی آکسیریبونیوکلک ایسڈ کے خلاف اینٹی باڈیز کا پتہ لگانا ان ٹیسٹوں (DNA) کی بنیاد ہے۔ موجودہ لیبارٹری تشخیص میں براہ راست شناخت (نمونوں میں Leptospira spirochetes یا DNA کا پتہ لگانا یا نمونوں سے جاندار کو الگ تھلگ کرنا) اور بالواسطہ پتہ لگانا (Leptospiral انفیکشن کی شناخت کے لیے سیرولوجیکل تشخیص یا سیرولوجی، دونوں شامل ہیں، جو مختلف قسم کے خلاف مخصوص اینٹی باڈیز کی نشاندہی پر مبنی ہے۔ Leptospiral antigens) (ٹیبل 1)۔

6.2.1 براہ راست مائکروسکوپک امتحان، ثقافت، اور اینٹیجن کا پتہ لگانے

لیپٹاسپائرز پتلے، روشن، فعال طور پر متحرک سرپل ہوتے ہیں جن میں روایتی ڈارک فیلڈ مائیکروسکوپ (DFM) کے تحت خصوصیت کے ساتھ تیزی سے گھومنے والی حرکت ہوتی ہے اور تقریباً 10 لیپٹاسپائرز/mL فی فیلڈ میں ایک خلیے کا پتہ لگانے کے لیے ضروری ہیں۔ انفیکشن کی مدت میں ایک ہفتہ زیادہ ہونے کے ساتھ، DFM کی پیداوار میں تقریباً 10% مردہ (100 سے 90% تک) ہوتے ہیں۔ حساسیت کو بڑھانے کے لیے، داغ لگانے کے کئی خاص طریقے؛ وارتھین- تارامی چاندی کے داغ [76] اور امیونوسٹیننگ (امیونو ہسٹو کیمسٹری، امیونو فلوروسینس، امیونو میگنیٹک اینٹیجن کیپچر، اور امیونوپیرو آکسیڈیز سٹیننگ [77]) جس میں سروور مخصوص بنیادی اینٹی باڈیز کی ضرورت ہوتی ہے (تنہائی یا مجموعہ میں)۔

ٹیبل 1. لیپٹوسپائروسس کی تشخیص کے لیے لیبارٹری ٹیسٹ۔

LAMP، لوپ ثالثی isothermal amplification; پی سی آر، پولیمریز چین ردعمل؛ این جی ایس، اگلی نسل کی ترتیب؛ IHA، بالواسطہ hemagglutination؛ ایلیسا، انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ؛ آئی جی ایم، امیونوگلوبلین ایم؛ MAT، میکروسکوپک ایگلوٹینیشن ٹیسٹ؛ MCAT، microcapsule aglutination ٹیسٹ؛ DNA، deoxyribonucleic acid؛ ڈی ایف ایم، ڈارک فیلڈ مائکروسکوپی

متوازی طور پر، خون، پیشاب، دماغی اسپائنل فلوئڈ، اور بایپسی ٹشو سے لیپٹوسپیرا کلچر بیماری کی علامات کے آغاز کے بعد کے چند دنوں سے لے کر 10 دنوں تک ممکن ہے۔ چونکہ یہ آہستہ بڑھنے والے ہیں (6-8 گھنٹے دوگنا وقت)، تیز رفتار، اور آلودگی کا شکار ہیں، ثقافت کے نمونوں کو منفی کے طور پر ضائع کرنے سے پہلے کم از کم 3-4 ماہ تک رکھنا چاہیے) صرف 23 فیصد حساسیت کے ساتھ لیکن یہ ضروری ہے۔ منشیات کی حساسیت کے ٹیسٹ کے لیے [6]۔ اس طرح، EMJH (Ellinghausen–McCullough–Johnson–Harris) میڈیا (oleic albumin Complex) بوائین سیرم البومین (فرکشن V)، ٹوین 80، امونیم کلورائیڈ تھامین، مونوپوٹاشیم فاسفیٹ، ڈسوڈیم فاسفیٹ، اور مختلف غذائی اجزاء پر مشتمل ہوتا ہے۔ عام طور پر استعمال کیا جاتا ہے، جب کہ کچھ سیروورز کے لیے زیادہ مخصوص T80/40/LH میڈیا (پولیسوربیٹ 40، لییکٹالبومین ہائیڈرولیزیٹ، سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز، اور خرگوش سیرم) کی ضرورت ہوتی ہے [79]۔ فاسٹڈیئس پیتھوجینک لیپٹوسپائرز کی بڑی اور متنوع رینج کی بنیادی تنہائی کے لیے، ہورنسبی – آلٹ – نالی (HAN)، ایک اچھا ذریعہ معلوم ہوتا ہے [80]۔

امیونوپیرو آکسیڈیز، امیونو فلوروسینس، یا امیونو میگنیٹک اینٹیجن کیپچر سسٹم کے ذریعے لیپٹو اسپائرل اینٹیجنز کا پتہ لگانا کم بیکٹیریل بوجھ والے نمونوں کے لیے تیار کیا گیا ہے یا ڈارک فیلڈ مائیکروسکوپی استعمال نہیں کی جا سکتی ہے لیکن بنیادی اینٹی باڈی [77] کی حد کی وجہ سے معمول کے مطابق نہیں کی جاتی ہے۔ اس کے برعکس، ناول ڈی این اے پروردن کے ساتھ نیوکلک ایسڈ کی پہچان؛ پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) (یعنی، nested-PCR، مقداری PCR [qPCR])، لوپ میڈیٹیڈ isothermal amplification (LAMP)، اور اگلی نسل کی ترتیب (NGS) ابتدائی اور درست لیبارٹری تشخیص کے لیے قابل قدر ہے، خاص طور پر حیاتیاتی میڈیا ٹیکہ کاری اور ڈی این اے ہائبرڈائزیشن (ڈی این اے تحقیقات) کا استعمال کرتے ہوئے لیپٹوسپیرا تنہائی [81,82]۔ مختلف قسم کے لیپٹو اسپائرل اہداف (جیسے 16S رائبوسومل آر این اے) یا ڈی این اے کو تشخیص کے لیے بڑھایا جا سکتا ہے [83] اور ریئل ٹائم پی سی آر (RT-PCR) معیاری PCR [84] سے زیادہ حساس اور مخصوص ہے۔ چونکہ کچھ RT-PCR پرائمر کسی غیر مخصوص سائٹ سے منسلک ہو سکتے ہیں، جس کے نتیجے میں غلط مثبت نتائج برآمد ہوتے ہیں، اس لیے حالیہ ریئل ٹائم ملٹی پلیکس PCR اسیس پرائمر کے دو سیٹوں کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے ہیں [85]۔ Nested PCR پرائمر کے اضافی سیٹوں کے ساتھ زیادہ مخصوص اور حساس DNA سائٹس کا پتہ لگانے میں بھی مدد کرتا ہے [86,87]۔ تاہم، لیپٹوسپائروسس کی تشخیص کے لیے موجودہ رجحانات سیرولوجیکل اور مالیکیولر دونوں تکنیکوں کا استعمال ہیں، جیسے کہ PCR اور ELISA (گولڈ اسٹینڈرڈ سیرولوجیکل MAT سے آسان)، وسائل محدود ممالک کے لیے [88,89]۔ مزید برآں، 16S rRNA جین (rrs) کا پتہ لگانے کے لیے LAMP تکنیک [90]، پیشاب میں پیتھوجینک لیپٹاسپائرز کا پتہ لگانے کے لیے ایک سرمایہ کاری مؤثر، تیز رفتار اور اعلیٰ پیداوار ہے۔ فی الحال، NGS جسمانی رطوبتوں (خون اور پیشاب) میں بنیادی جینوم کے تجزیہ پر سب سے واضح طور پر مبنی ثقافت سے آزاد طریقہ ہے [91] اور لیپٹوسپائروسس ٹیسٹوں کی مستقبل کی سمت لیپٹاسپائرز کی مالیکیولر درجہ بندی کی طرف بڑھنا ہو گی، جو اس کی محدودیت پر قابو پاتی ہے۔ کلینیکل نمونوں سے لیپٹاسپائر کی ثقافتی تنہائی۔ لہذا، لیپٹوسپائروسس کی طبی تشخیص میں پی سی آر کی اہمیت خاصی اچھی ہے اور کئی جدید تکنیکیں ابھر رہی ہیں۔

6.2.2. اینٹی لیپٹوسپیرا اینٹی باڈی کا پتہ لگانا

کئی سیرولوجیکل تشخیص کا استعمال کیا جاتا ہے؛ مثال کے طور پر، جینس کے مخصوص اینٹی باڈی ٹیسٹ (بالواسطہ ہیمگلوٹینیشن [IHA]، انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ [ELISA]، Lepto Dri Dot [latex agglutination]، microcapsule agglutination [MCAT])، اور serovar-specific antibody tests (microscopic a test) میٹ]) [92,93]۔ اس طرح، تشخیص کے لیے MAT کے معیارات ہیں (i) جوڑے والے سیرا میں چار گنا اضافہ (موجودہ انفیکشن کا سیرو کنورژن) یا (ii) ایک ہی ہائی ٹائٹر (1:400 یا 1:800 سے بڑا یا اس کے برابر، وبا میں زیادہ ایریاز) (سیرو پازیٹیوٹی) (انفیکشن کے بعد اینٹی باڈیز کچھ عرصے تک برقرار رہ سکتی ہیں یا دوسری بیماریوں کے ساتھ کراس ری ایکٹ کر سکتی ہیں)۔ مزید برآں، MAT کو خطے کے تمام لیپٹوسپیرا سیروورز کے ایک لائیو پینل کی ضرورت ہوتی ہے، جس میں مقامی طور پر معیاری سیروورز کا ایک پینل ہوتا ہے [93,94] ورلڈ آرگنائزیشن فار اینیمل ہیلتھ (15 سیرو گروپس کے 19 اینٹیجنز نمائندہ) [95]۔ چونکہ انفیکشن کے بعد 5-7 دنوں میں اینٹی باڈیز کا پتہ لگایا جا سکتا ہے، اس لیے انفیکشن کے پہلے چند دنوں کے دوران MAT ٹیسٹ منفی (ٹائٹر <1:50) ہو سکتا ہے۔ لیپٹوسپائروسس کی تشخیص پیشاب کے نمونوں کے ذریعے کی جا سکتی ہے [96] سیرولوجی اور مالیکیولر ڈٹیکشن (16S rRNA) دونوں کا استعمال کرتے ہوئے، خاص طور پر حالیہ انفیکشن والے مریضوں میں (MAT 1:800 سے زیادہ یا اس کے برابر یا ELISA IgM- مثبت یا دونوں) [97] .

محدود وسائل کے ساتھ، متعلقہ طبی تاریخ اور متعلقہ لیبارٹری ٹیسٹوں کی بنیاد پر سات پہلوؤں میں اسکورنگ کے ساتھ کلینکل پیشن گوئی کا اسکور [98] درج ذیل ہے: ہائپوٹینشن (3)، یرقان (2)، پٹھوں میں درد (2)، AKI (1.5) ، کم ہیموگلوبن (3)، ہائپوکلیمیا کے ساتھ ہائپوناٹریمیا (3)، اور نیوٹروفیلیا (1) تجویز کیا گیا ہے (4 کا کٹ آف خلاصہ اسکور میں ریسیور آپریٹنگ خصوصیت وکر کے نیچے کا رقبہ ہوتا ہے {{10}}.78 ( 95% CI 0.68–0.89) لیپٹوسپائروسس کی تشخیص کے لیے [77])۔ یہ تھائی-لیپٹو-آن-داخلہ امکانی اسکور ان مریضوں میں لیپٹوسپائروسس کی ابتدائی تشخیص کے لیے ایک تشخیصی آلہ ہو سکتا ہے جو اس بیماری کے شدید طبی شبہ کے ساتھ پیش ہوتے ہیں۔